Afc spermograma. Oksidacinio streso vaidmuo įvairių vyrų nevaisingumo formų patogenezėje

- [2 puslapis] -

1 pav. Dažniausios patologinės būklės vyrams iš nevaisingų porų su hiperprodukcija ROS.

Apskritai ROS hiperprodukcija, mūsų duomenimis, yra 38,2% pacientų, turinčių įvairių spermos kokybės sutrikimų. Vyrų, sergančių hiperprodukcija ROS, aktyvaus uždegimo fazėje dažniausiai nustatėme varikocelę (38,9% atvejų) ir lėtinį bakterinį prostatitą (25,1% atvejų); 8,9% vyrų - cistos prieduose, 1,2% - vieno ar abiejų kraujagyslių nebuvimas.

52,2% atvejų ROS hiperprodukcijos fone mes nustatėme autoimunines reakcijas prieš spermatozoidus, kartu su ASAT gamyba (1 pav.).

ROS perprodukcijos fone normospermija buvo nustatyta 19,3% atvejų. Taigi mes nustatėme, kad oksidacinį stresą 80,7% atvejų lydėjo spermos kokybės pablogėjimas. Be to, dažniausiai pastebėta astenozoospermija - 71,4% atvejų, tada teratozoospermija - 36,3%, oligozoospermija - 28,3%, pyospermija - 21,3%, imuninis nevaisingumas, kai daugiau nei pusė judriųjų spermatozoidų yra padengta antikūnais, - 10,6%; 5% atvejų - azoospermija. Reikėtų pažymėti, kad paprastai buvo kelių diagnozių derinys. Akrosominio atsako pažeidimas oksidacinio streso fone buvo pastebėtas daugiau nei pusėje visų atvejų. Atsižvelgiant į didelį nevaisingų porų vyrų tam tikrų patologinių būklių pasireiškimo dažnumą, skubiai užduotis buvo išsiaiškinti oksidacinio streso išsivystymo rizikos laipsnį įvairių etiopatogenetinių veiksnių fone (2 pav.).

Mes nustatėme, kad vyrų lytinių organų infekcinės ir uždegiminės ligos, ypač lėtinis bakterinis prostatitas, 64,1% atvejų sukelia spermos oksidacinį stresą, santykinė rizika yra 2,9. Imuninio nevaisingumo fone absoliuti oksidacinio streso rizika yra 40,2–71,0%, santykinė - 1,5–2,9 (priklausomai nuo ASAT kiekio). Varikocele absoliuti spermos oksidacinio streso rizika buvo atitinkamai 29,3-68,1%, santykinė - 1,6-2,6.

Taigi svarbiausios oksidacinio streso išsivystymo priežastys buvo lėtinis bakterinis prostatitas aktyvaus uždegimo fazėje, autoimuninės reakcijos prieš spermatozoidus ir varikocelę. Šios patologinės būklės dažniausiai buvo diagnozuotos vyrų nevaisingumui, o jų fone buvo didelė oksidacinio streso rizika.

Mes ištyrėme oksidacinio streso ypatybes grupėse, turinčiose įvairių vaisingumo sumažėjimo priežasčių. Mes nustatėme, kad sergant varikocele (n = 294), ROS gamyba buvo 0,48 + 0,40 mV / s, o individualus reikšmių pasiskirstymas buvo nuo 0,01 iki 66,15 mV / s, o tai yra 1,9 karto didesnis nei vaisingiems pacientams, nesant ACAT ir 8 kartus esant autoimuninėms reakcijoms.

2 pav. Absoliuti spermos oksidacinio streso rizika esant įvairiems vyrų nevaisingumo etiopatogenetiniams veiksniams . Pastaba:*** - skirtumai, palyginti su vaisingų vyrų grupe, yra reikšmingi pagal chi kvadrato testą su p<0,001

Tuo pačiu metu, atlikus koreliacijos analizę, nenustatyta ryšio tarp varikocelės sunkumo ir ROS lygio spermoje, kita vertus (R = -0,004; gama = -0,004; t = -0,003 ; p> 0,05).

Mes išanalizavome ROS gamybos ypatumus vyrų, sergančių įvairiomis varikocelės formomis, ejakuliacijoje. Mes nustatėme, kad hiperprodukcija aktyviųjų radikalų subklinikine spermatozoidinių venų išsiplėtimo forma pastebėta 31,2 proc., Pirmuoju - 33,9 proc., Antruoju - 25,5 proc., 42,9 proc. - trečiuoju. Taigi statistiškai reikšmingų reaktyviųjų deguonies rūšių hiperprodukcijos skirtumų nebuvo (p> 0,05).

Remiantis mūsų duomenimis, tiriant nevaisingų porų vyrus, norint nustatyti subklinikines varikocelės formas, būtina atlikti kapšelio organų ultragarsą. Nustatyta varikocelės diagnozė yra absoliuti indikacija ROS lygiui nustatyti.

ROS perprodukcijos varikocele fone, mūsų nuomone, parodomas chirurginis gydymas, neatsižvelgiant į varikocelės laipsnį.

Esant vienodam spermatozoido venų išsiplėtimo laipsniui, padidėjus nevaisingumo trukmei, padidėjo ROS gamyba (p<0,04-0,01); в среднем по группам у пациентов с варикоцеле степенью +1 при продолжительности бесплодия от 12 до 36 мес. она составляла 0,39+0,23 мВ/с, при бесплодии больше 36 мес – 0,64+0,45 мВ/с (p<0,05). Исходя из этого, прогноз оперативного лечения в раннем возрасте в плане восстановления фертильности более благоприятный, а выжидательная тактика ведения пациентов с варикоцеле не является обоснованной, учитывая высокий риск оксидативного стресса.

Lėtinio prostatito (n = 130) fone nustatėme tiesioginę aktyviųjų deguonies radikalų gamybos priklausomybę nuo leukocitų skaičiaus prostatos sekrete (R = 0,24; p = 0,04). Padidėjus leukocitų skaičiui prostatos sekrecijoje, pyospermija pastebėta 36,1% atvejų. ROS gamybos priklausomybė nuo leukocitų koncentracijos spermoje (R = 0,29; p<0,00001) сильнее, чем от содержания лейкоцитов в секрете простаты.

Pacientų, kuriems diagnozuota pyospermija, spermoje buvo didelis ROS kiekis: vidutiniškai grupės produkcija buvo 9,81 +/- 25,56 mV / s (atmetus + 3S reikšmes - 1,15 + 1,34 mV / s) s Nuo 0,07 iki 153,50 mV / s; mediana yra 0,925 mV / s, nelaisvėje esančių verčių diapazonas yra nuo 0,07 iki 9,52 mV / s, o tai yra žymiai didesnis (3,9 karto) nei vaisingiems vyrams (p<0,001).

Reikšminga koreliacija tarp leukocitų koncentracijos spermoje ir bakteriospermijos sunkumo (R = 0,23; p = 0,033), bakteriospermijos sunkumo ir ROS gamybos (r = 0,35; p<0,01).

Remdamiesi gautais duomenimis, nustatėme teigiamą ryšį tarp ROS gamybos ir spermos agliutinacijos vyrams iš nevaisingų porų, sergančių pathozoospermija. Be to, atmetus mėginius su pyospermija, koreliacijos koeficientas reikšmingai sumažėjo: R = 0,13 (p> 0,05), Gama = 0,30 (p = 0,05).

Neįtraukus analizės mėginių, kurių spermos koncentracija yra mažesnė nei 10 milijonų / ml, ir pašalinių rodiklių (+ 2S), buvo galima tiksliau nustatyti ROS gamybą ir autoimuninių reakcijų aktyvumą. Šiomis sąlygomis vyrų, sergančių lėtiniu prostatitu, lydimu pyospermijos, ROS gamyba yra 8,8 karto didesnė nei vaisingose, o ryšys tarp ROS kiekio ir leukocitų yra ryškesnis (R = 0,44) nei visame mėginyje. spermoje ...

Uždegiminio proceso vaidmenį didinant ROS gamybą spermoje patvirtina lėtinio prostatito terapijos antibiotikais rezultatai (1 lentelė). Buvo įrodyta, kad po 2 savaičių gydymo leukocitų kiekio sumažėjimas prostatos sekrecijoje sumažėjo 39,1% (p<0,01) и на 35,2% в сперме (p>0,05), daugiau nei dvigubai sumažėja ROS gamyba (-58,1%; p<0,05). Одновременно происходит улучшение жизнеспособности (p<0,05) и подвижности (p<0,05), нормализация акросомальной реакции сперматозоидов в виде уменьшения доли гамет, преждевременно утративших целостность акросомальной мембраны (p<0,05), а у пациентов с АСАТ – снижение процента MAR-позитивных сперматозоидов (p<0,01).

Taigi nevaisingų porų, sergančių prostatitu, tyrimo duomenų analizė parodė, kad padidėjęs leukocitų skaičius spermoje prostatito fone yra pagrindinis reaktyviųjų deguonies rūšių hiperprodukcijos šaltinis, sukelia oksidacinį stresą ir funkcinių savybių pokyčius spermatozoidų.

Pusėje (51,5%) pacientų iš nevaisingų porų, sergančių pyospermija, rasta ACAT, tačiau tik 9,2% jų buvo daugiau nei 50% judrių spermatozoidų.

Nėra koreliacijos tarp leukocitų koncentracijos spermoje ir ACAT teigiamų judrių spermatozoidų procentų (R = 0,0; p> 0,05).

Mes nustatėme, kad laisvųjų radikalų gamyba labiau priklauso nuo antikūnų kiekio spermoje (R = 0,81), o ne nuo judrių MAP teigiamų lytinių ląstelių procento (R = 0,44), nustatytos naudojant PCM metodą, kurį mes rekomenduojame kaip daugiau tiksliai apibūdina autoimuninių procesų aktyvumą ejakuliate.

Mes išanalizavome ROS gamybos ypatumus įvairiomis patospermijos formomis. Teratozoospermija sergančių pacientų spermogramos indeksų koreliacijos analizė neparodė ryšio tarp patologinių formų procento ir ROS gamybos. Tačiau yra ryšys tarp spermatozoidų, kurių kaklas pakitęs, procentinės dalies ir ROS gamybos ir ACAT nebuvimo: r = 0,2; p<0,01. Также в этой выборке обнаружена положительная корреляция между продукцией АФК и процентом сперматозоидов, спонтанно претерпевших акросомальную реакцию: r=0,24; p<0,05 для группы пациентов с нормальной концентрацией сперматозоидов и лейкоцитов.

ROS lygio padidėjimą teratozoospermijoje galima paaiškinti aktyvių radikalų išsiskyrimu, pažeidus spermos membranas, sulaikant citoplazmą ir, atvirkščiai, o tai greičiausiai yra morfologiškai defektinių lytinių ląstelių susidarymo pasekmė. Tokiu atveju sutrinka normali akrosominės reakcijos eiga ir atsiranda lytinių ląstelių apoptozė, pakenkiant jų DNR vientisumui (Aitken et al., 1989; Saleh et al., 2003; Jedrzejczak et al., 2005; Deepinder F. , 2008).

Morfologiškai pakitę spermatozoidai, kurių DNR defektai, turi mažai galimybių apvaisinti kiaušialąstę, o nėštumo atveju yra didelė genetinių vaisiaus anomalijų rizika.

1 lentelė

Aktyvių deguonies faktorių, spermogramos indeksų, akrosomų reakcijos, ACAT teigiamų spermatozoidų procentinės dalies ir prostatos sekrecijos pokyčiai vyrams iš nevaisingų porų gydant lėtinio prostatito antibiotikais (M + SE)

Rodikliai	Vyrai, sergantys prostatitu(n = 48)
Rodikliai	Prieš gydymą	Po 2 savaičių atsigultieniya
Reaktyviosios deguonies rūšys, mV / s	22,1+6,91	9,28+4,63**
Spermos leukocitai, x 106 / ml	2,07+0,52	1,34+0,58
A kategorijos spermatozoidai,%	14,1+1,53	18,3+1,7*
Gyvi spermatozoidai,%	73,0+2,7	77,6+2,7*
Prostatos sekrecijos leukocitai, matymo lauko vienetai	27,6+4,6	16,8+3,8**
MAR IgG teigiami spermatozoidai,%	31,8+6,93	26,1+6,51**
Ankstyva akrosominė reakcija,%	23,3+2,57	18,1+2,21*
Sukelta akrosominė reakcija,%	32,9+3,14	31,7+2,83
Akrosominės reakcijos sužadinamumas,%	8,8+2,6	13,6+2,3

2
1 Rusijos Federacijos Administracinio departamento FSBI „Poliklinika Nr. 1“, Maskva; NUZ "Kelių klinikinė ligoninė, pavadinta N.А. Semaško “, Maskva; Valstybinė biudžetinė aukštojo mokslo įstaiga „Pirmasis Maskvos valstybinis medicinos universitetas, pavadintas JUOS. Sečenovas "Rusijos Federacijos sveikatos ministerija; FGAOU VO „RUDN“, Maskva
2 NUZ "Kelių klinikinė ligoninė, pavadinta N.А. Semaško “, Maskva
3 NUZ "Kelių klinikinė ligoninė, pavadinta N.А. Semaško “, Maskva; Valstybinė biudžetinė aukštojo mokslo įstaiga „Pirmasis Maskvos valstybinis medicinos universitetas, pavadintas JUOS. Sečenovas "Rusijos Federacijos sveikatos ministerija

Vyrų faktorius pasireiškia pusei nevaisingų santuokų atvejų. Dabar visuotinai pripažįstama, kad dažniausia vyrų nevaisingumo priežastis - 35–40% atvejų - yra idiopatinė oligo-, asteno- ar teratozoospermija, kai pastebimi spermos kiekybinių ir kokybinių parametrų pažeidimai, kai nėra anamnezės rizikos veiksnių , nėra medicininės apžiūros ir hormoninių tyrimų rezultatų pažeidimų. Antioksidantai yra populiarus vyrų nevaisingumo gydymo būdas. Tačiau duomenys apie jų veiksmingumą yra nenuoseklūs.
Tyrimo tikslas: parodyti buitinio biologiškai aktyvaus komplekso „AndroDoz®“ galimybes gydyti idiopatinį vyrų nevaisingumą.
Medžiaga ir metodai: tyrime dalyvavo 30 vyrų iš 25–45 metų nevaisingų porų. Ejakuliato tyrimas buvo atliktas pagal PSO rekomendacijas. Nustatė reaktyviųjų deguonies rūšių kiekį natūraliuose ejakuliato ir nuplautuose spermatozoiduose. Spermos chromosomų pažeidimams būdinga DNR fragmentacija, įvertinta chromatino dispersija agarozės gelyje. Ejakuliato analizė buvo atlikta prieš gydymą ir gydymo AndroDoz® metu per burną, po 4 kapsules per dieną (2 ryte ir vakare).
Rezultatai: po 1,5 mėn 2/3 pacientų DNR fragmentiškumas procentais ir laipsniu sumažėjo vidutiniškai atitinkamai 5 ir 10% (p<0,01); уменьшилась выраженность оксидативного стресса в 70% случаев в среднем по группе более чем в 2 раза (p<0,05). Показатели стандартной спермограммы при этом не менялись.
Išvados: vaistas „AndroDoz®“ gali būti naudojamas gydant idiopatinį vyrų nevaisingumą su oksidacinio streso požymiais ir spermos DNR vientisumo pažeidimais; apie 2/3 pacientų į šią terapiją reaguoja teigiamai pakeisdami spermos kokybę.

Raktažodžiai: vyrų nevaisingumas, oksidacinis stresas, DNR fragmentacija, antioksidantai.

Norėdami cituoti: Bozhedomov V.A., Lipatova N.A., Bozhedomova G.E., Shcherbakova E.V., Komarina R.A. Maistinių medžiagų komplekso naudojimas vyrų nevaisingumui gydyti // BC. 2016. Nr. 23. S. 1546-1552

Maisto priedas, skirtas vyrų nevaisingumui
Bozhedomovas V.A. 1–4, Lipatova N.A. 2, Bozhedomova G.E. 2,3, Ščerbakova E.V. 2, Komarina R.A. 2

1 Ambulatorinis skyrius Nr. 1 Prezidento reikalų departamentas, Maskva
2 N.A. Klinikinė Semaško ligoninė, Maskva
3 .M. Sečenovo pirmasis Maskvos valstybinis medicinos universitetas
4 Tautų Rusijos draugystės universitetas, Maskva

Pusė nevaisingų vedybų atvejų lemia vyrų nevaisingumą. Dažniausios vyrų nevaisingumo priežastys (35–40%) yra idiopatinė oligospermija, astenospermija ir (arba) teratospermija. Šiais atvejais nenormalus spermatozoidų kiekis ir kokybė nėra susiję su anamnezės rizikos veiksniais, nenormaliais medicininiais tyrimais ar hormonų disbalansu. Antioksidantai yra populiari vyrų nevaisingumo priemonė, tačiau jų veiksmingumas yra prieštaringas.
Tikslas. Išanalizuoti buitinio priedo AndroDoz® efektyvumą idiopatiniam vyrų nevaisingumui.
Pacientai ir metodai. Buvo įregistruota 30 vyrų iš 25–45 metų nevaisingų porų. Ejakuliatas buvo tiriamas pagal PSO rekomendacijas (įskaitant ROS matavimą vietiniuose ejakuliatuose ir nuplautuose spermatozoiduose). Spermatozoidų chromosomų aberacijos buvo įvertintos pagal DNR fragmentaciją, įvertintą spermatozoidų chromatino dispersijos testu. Ejakuliatas buvo išbandytas prieš gydymą ir jo metu (geriamosios „AndroDoz® 2“ kapsulės du kartus per dieną).
Rezultatai. Po 1,5 mėnesio dviejų trečdalių pacientų DNR fragmentacijos procentas ir laipsnis sumažėjo atitinkamai 5% ir 10% (p<0.01). The severity of oxidative stress decreased more than twice in 70% of the patients (p<0.05). Standard spermogram parameters remained unchanged.
Išvados. AndroDoz® galima rekomenduoti idiopatiniam vyrų nevaisingumui esant oksidaciniam stresui ir pakitusiam spermatozoidų DNR vientisumui. Du trečdaliai pacientų reaguoja į šį gydymą, parodydami spermos kokybės pagerėjimą.

Raktažodžiai: vyrų nevaisingumas, oksidacinis stresas, DNR fragmentacija, antioksidantai.

Norėdami cituoti: Bozhedomov V.A., Lipatova N.A., Bozhedomova G.E. ir kt. Maisto priedas vyrų nevaisingumui // RMJ. 2016. Nr. 23. P.1546 –1552.

Straipsnyje aptariamas maistinių medžiagų komplekso naudojimas vyrų nevaisingumui gydyti

Įvadas

Vyrų faktorius pasireiškia pusei nevaisingų santuokų atvejų. Dabar visuotinai pripažįstama, kad dažniausia vyrų nevaisingumo priežastis - 35–40% atvejų - yra idiopatinė oligo-, asteno- ar teratozoospermija, kai pastebimi spermos kiekybinių ir kokybinių parametrų pažeidimai, kai nėra anamnezės rizikos veiksnių , nėra medicininės apžiūros ir hormoninių tyrimų rezultatų pažeidimų.
Tokiais atvejais buvo išbandyta daugybė skirtingų vaistų, siekiant pagerinti spermos kokybę. Pastaraisiais metais aktyviai naudojami antioksidantai, kurie yra natūralios arba sintetinės biomolekulės, kurios užkerta kelią ląstelių pažeidimams dėl oksidacinio streso (OS), kurį sukelia per didelis reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) kiekis. Antioksidantai yra vitaminai E, C, A, karnitinai, cinkas, selenas, augalų ekstraktai ir kai kurie kiti vaistai bei medžiagos. Keli atsitiktinių imčių klinikiniai tyrimai parodė antioksidantų papildų galimybę gydyti vyrų nevaisingumą. Pagal metaanalizių rezultatus M.G. Showell ir kt. antioksidantai pagerina gyvybingumą, susikaupimą ir progresyvų judrumą, prisijungimą prie kiaušinio, sumažina spermatozoidų DNR fragmentaciją, padidina natūralaus pastojimo ir pagalbinio apvaisinimo technologijos programų nėštumų procentą. Tačiau apibūdindami į analizę įtrauktų tyrimų kokybę, apžvalgos autoriai pažymi, kad įrodymų lygis yra „žemas“ ir „labai žemas“. Autoriai daro išvadą: "Antioksidantai galėjo būti veiksmingi gydant nevaisingus vyrus, tačiau tyrimų rezultatų pateikimas buvo per daug nenuoseklus, kad būtų tikras dėl šių rezultatų". Pasak E.G. Hughes ir kt. , antioksidantų derinys yra efektyvesnis: savaiminio nėštumo tikimybė padidėja 4,2 karto (95% PI 2,7–6,6), gimdymas - 4,9 karto (95% PI 1,9–12,2). Antioksidantų maža kaina ir santykinai maža toksiškumo rizika yra patraukli pacientams ir gydytojams, todėl vyrų nevaisingumui gydyti juos rekomenduoja Europos urologijos asociacija (EAU), tačiau, kaip pabrėžiama naujausiose EAU gairėse, ne idiopatinėms formoms.
Šio tyrimo tikslas: parodyti buitinio biologiškai aktyvaus komplekso „AndroDoz®“ galimybes gydyti idiopatinį vyrų nevaisingumą. „AndroDose®“ yra papildomas L-karnozino, karnitino, kofermento Q10, glicirizino rūgšties, seleno, cinko, vitaminų E ir A šaltinis.

Medžiaga ir metodai

Tyrimas vyko 2016 m. Vasario – liepos mėn. Jame dalyvavo 30 nevaisingų porų 25–45 metų vyrų. Tyrimo įtraukimo kriterijai buvo šie:
daugiau nei 12 mėnesių nėščia santuoka. lytinis aktas be kontracepcijos;
spermos buvimas ejakuliate;
idiopatinė oligo-, asteno- arba teratozoospermija;
reprodukcinio trakto infekcijų (Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Trichomonas vaginalis) nebuvimas, diagnozuotas polimerazės grandinine reakcija;
nėra papildomų lytinių liaukų uždegiminio proceso klinikinių ir laboratorinių požymių;
ryškių autoimuninių reakcijų prieš spermatozoidus nebuvimas, kai antisperminiai antikūnai (ASAT) apima ne daugiau kaip dešimtąją judriųjų gametų (MAR IgG)<10%);
apčiuopiamos varikocelės nebuvimas;
ryškios somatinės patologijos trūkumas;
psichoseksualių ir ejakuliacijos sutrikimų nebuvimas.
Atmetimo kriterijai buvo šie:
nustatytos genetinės nevaisingumo priežastys (Klinefelterio sindromas, AZF mikrodeleteliai, CFTR);
azoospermija;
pirospermija;
folikulus stimuliuojančio hormono perprodukcija;
apčiuopiama varikocelė, patvirtinta ultragarsu;
imuninio nevaisingumo faktoriaus buvimas (MAR IgG> 10%);
sunki somatinė patologija;
psichoseksualių ir ejakuliacijos sutrikimų.
Ejakuliato tyrimas buvo atliktas laikantis PSO reikalavimų: nustatyta normalių formų koncentracija, judrumas ir proporcija, progresyviai judančių spermatozoidų skaičius ejakuliate ir vientisas spermos kokybės indeksas (ejakuliato tūris x spermos koncentracija x buvo apskaičiuota laipsniškai judančių formų dalis x normalių formų dalis). Judrių spermatozoidų, padengtų ACAT, procentas (SpermMar Kit, FertiPro, Belgija) buvo nustatytas mišrios agliutinacijos metodu. OS buvo įvertinta nustatant laisvųjų radikalų procesų intensyvumą nuo liuminolio priklausoma chemiliuminescencija, naudojant LKB-Wallac 1256 luminometrą (Suomija) ir Chemiluminometer-003 (Rusija). Chemiliuminescencijos intensyvumas buvo vertinamas pagal šviesos sumą ir didžiausią liuminescencijos amplitudę, kuri atitiko ROS susidarymo greitį. ROS buvo nustatytas natūraliuose ejakuliatuose ir nuplautuose spermatozoiduose pagal PSO gairėse aprašytą protokolą. Spermos chromosomų pažeidimams būdinga DNR fragmentacija, įvertinta chromatino dispersija (Halosperm®; Halotech DNR, Ispanija) inertiniame agarozės gelyje, vizualiai įvertinant halo susidarymo mikroskopu po DNR rūgšties denatūravimo ir branduolio baltymų lizės. Laikantis bandymo sistemos gamintojo rekomendacijų, spermatozoidų, turinčių apoptozės požymių, procentas ir aureolės susidarymo sutrikimo laipsnis buvo įvertintas 5 balų skalėje.
Ejakuliato analizė buvo atlikta prieš gydymą ir gydymo AndroDoz® metu per burną, po 4 kapsules per dieną (2 ryte ir vakare). Keletas šalies leidinių jau aprašė šio vaisto poveikį vyrams. Mūsų tyrimo ypatumas buvo įvertinti ne tik standartinės spermogramos rodiklius, bet ir ROS gamybą bei chromatino būseną, kuri dažnai sutrinka OS.
Empiriniai duomenys buvo apdoroti naudojant „Statistica“ programinę įrangą („StatSoft“, JAV). Grupės vidurkiai buvo pateikti kaip M ± SD, mediana, 25–75% procentilės, nelaisvėje. „Box-and-whisker“ siužetuose „pašaliniai“ buvo taškai, kurie buvo toli nuo pasiskirstymo centro ir nebuvo jam būdingi (galbūt tai yra stebėjimo klaidų arba pašalinių rezultatų rezultatai). Skirtumų tarp grupių reikšmingumas buvo patikrintas naudojant studento testą poromis susijusiam variantui (t), ženklams (Z), Wilcoxon (W); skirtumai buvo laikomi reikšmingais p<0,05.
Pateikiame duomenis apie ankstyvą (1,5 mėn.) Gydymo pastebėtą poveikį.

rezultatus

Vidutinis į tyrimą įtrauktų pacientų amžius buvo 34,0 + 6,95 metai. Pirminis nevaisingumas buvo 18 žmonių (59%), nevaisingumo trukmė vidutiniškai 28,9 ± 15,9 mėnesio grupėje.
Pagrindiniai spermogramos rodikliai yra ejakuliacijos tūris, koncentracija, progresuojančios judrumo ir morfologiškai normalių spermatozoidų kiekis po 1,5 mėnesio. gydymas reikšmingų pokyčių nepadarė (1 lentelė). Atitinkamai integralinės apskaičiuotos vertės nepakito: progresuojančių judrių spermatozoidų skaičius ejakuliatūroje ir spermos kokybės indeksas (žr. 1 lentelę; p> 0,05). Tuo pačiu metu buvo pastebėtas statistiškai reikšmingas spermatozoidų, turinčių mišrią patologiją, procentinės dalies sumažėjimas: absoliučiomis vertėmis - 8% grupės vidurkiui ir 11% medianai (1 pav. P<0,01); положительная динамика данного показателя имела место у 80% пациентов (p<0,01).

Po 1,5 mėn. gydymo metu pastebėtas reikšmingas spermos DNR pažeidimo sumažėjimas (2 lentelė; 2 pav.). Spermatozoidų, turinčių DNR fragmentaciją, procentinė dalis absoliučiomis reikšmėmis grupėje vidutiniškai sumažėjo 4%, mediana - 5% (palyginti su pradiniu lygiu -23% vidurkiui, p<0,01 и −28% для медианы, р=0,01); меньше стала степень выраженности таких нарушений, оцениваемых по степени дисперсии хроматина (−10% для средней, p<0,05 и −12% для медианы, p<0,01). Положительная динамика фрагментации ДНК на фоне лечения имела место у 67% мужчин (p>0,05).

Gydymo metu OS sunkumas žymiai sumažėjo, ką įrodo 70% atvejų nuplautų spermatozoidų ROS gamybos sumažėjimas (3 lentelė; p<0,05) в среднем по группе более чем в 2 раза; изменения медианы были еще более наглядны – −82% (рис. 3; p<0,05). При этом продукция АФК в нативном эякуляте изменялась статистически несущественно и даже имела тенденцию к повышению (см. табл. 3; p>0,05).

Diskusija

Pasak įvairių leidinių, antioksidantai yra populiarūs vaistai spermos kokybės sutrikimams gydyti. Įvairios farmacijos kompanijos siūlo paruoštų maistinių medžiagų kompleksų, kurie, pasak gamintojų, gali pagerinti vyrų vaisingumą. Mūsų duomenys patvirtino teigiamą vidaus komplekso „AndroDoz®“ poveikį vyrų nevaisingumui, susijusiam su OS. ROS gamyba išplautų spermatozoidų, mūsų tyrimo duomenimis, sumažėjo vidutiniškai 2–5 kartus, palyginti su pradiniu lygiu. Viduląstelinės OS sunkumas, įvertintas išplautų spermatozoidų gaminant ROS, yra ypač svarbus, nes artimas spermatogeninių laisvųjų radikalų ir spermos DNR artumas lemia didžiausią jų vaidmenį pažeidžiant vaisingumą.
Tuo pačiu metu sumažėjo spermatozoidų su DNR fragmentais procentas ir tokių chromatino sutrikimų sunkumas. Skaldymo indeksas sumažėjo vidutiniškai 4–5% absoliučiais skaičiais arba beveik ketvirtadaliu pradinio lygio. Kadangi ryšį tarp ROS kiekio spermoje, spermos OS sunkumo ir jų DNR fragmentiškumo pripažįsta dauguma specialistų, atrodo, kad tokie mūsų tyrimo rezultatai yra gana logiški.
Tuo pačiu metu buvo nustatyta, kad teigiama ROS gamybos dinamika ir DNR fragmentacija gydymo metu vyko tik 2/3 atvejų. Tuo pačiu metu šių rodiklių pagerėjimas ne visada buvo pastebėtas esant aukštam OS ir DNR fragmentacijos lygiui ir atvirkščiai. Mums lieka neaišku, kodėl viduląstelinės OS sunkumas, vertinamas pagal ROS gamybą plaunant spermatozoidus, sumažėjo, tačiau ROS gamyba vietiniame ejakuliate nepakito, nes abiem atvejais antioksidantai turėjo chemiškai surišti aktyviuosius radikalus. Kadangi šiame tyrime dalyvavo pacientai, neturintys infekcinio-uždegiminio proceso požymių, poveikį sunku paaiškinti spermos leukocitų įtaka. Šių modelių išaiškinimas turėtų būti tolesnių tyrimų objektas.
Tuo pačiu metu mūsų duomenys parodė, kad standartiniai spermogramos rodikliai - spermatozoidų tūris, koncentracija, judrumas ir morfologija - gydymo fone pasikeitė nežymiai, tuo tarpu, pasak A.A. Kamalova ir kt. , spermos analizės padidėjimas įvyksta 87,6%, pasak M.K. Alchinbaeva ir kt. - 92% atvejų. E.S. Dendeberovas ir kt. parašykite, kad AndroDoz naudojimas po 3 mėn. lėmė, kad ejakuliato tūris padidėjo 45,7%, spermos koncentracija - 18,5%, bendras judrumas - 33,7%, aktyvus - 38,4%, o morfologiškai normalių formų skaičius - 50%. A. A. duomenys Proskurina ir kt. dar optimistiškiau: tūrio padidėjimas 1,95 karto, judrumas - 7,43 karto, koncentracija - 1,53 karto, o įprastų formų procentinė dalis - 6,75 karto, palyginti su pradinėmis vertėmis. Tačiau tokie duomenys kelia abejonių: iki šiol nėra gydymo būdų, kurie padidintų įprastų formų dalį 50–675%.
Mūsų tyrime nebuvo reikšmingo standartinės spermogramos indeksų pagerėjimo (išskyrus spermos, turinčios mišrią patologiją, procentinės dalies sumažėjimą, teigiama šio rodiklio dinamika įvyko 80% atvejų), galbūt dėl tai, kad stebėjimo laikotarpis buvo tik 1,5 mėnesio, tuo tarpu, kadangi spermatogenezės ciklo trukmė, įskaitant perėjimo per epididimą laikotarpį, yra apie 3 mėnesiai. Gali būti, kad ilgiau vartojant vaistą gali pagerėti kiti standartinės spermogramos rodikliai. Taip pat akivaizdu, kad svarbūs yra pradiniai spermogramos rodikliai: oligo-, asteno- ir teratozoospermijos laipsnis bei jų derinys. Vėlesniuose leidiniuose bus aptariamas vaisto galimybių išaiškinimas gydant įvairias pathozoospermijos formas.
Išvada, kad naudojant komercinius vitaminų ir antioksidantų kompleksus ne visada ryškiai pagerėja standartinės spermogramos parametrai, atitinka daugelio užsienio kontroliuojamų tyrimų duomenis. Taigi paskyrus antioksidantų kompleksą spermos judrumas pagerėjo tik 3 iš 6 tokių tyrimų, koncentracija padidėjo tik 1 iš 6.
Galbūt konkretaus antioksidanto veiksmingumas priklauso nuo jo kokybinės ir kiekybinės sudėties. Veiksmingos antioksidacinių monopreparatų dozės, remiantis daugeliu apžvalgų, yra: vitaminas E> 300 mg per parą, vitaminas C> 1000 mg per parą, karnitinai (L ir acetil -)> 3000 mg per parą, selenas - 100–225 μg per parą, kofermentas Q10 - 60-200 mg per parą, cinkas (ZnSO4) - 66-400 mg per parą, glutationas - 600 mg per parą, o tai žymiai viršija nustatytą didžiausią leistiną šių medžiagų suvartojimo normą per parą ir daro jas nesaugus ilgalaikiam naudojimui. Nesubalansuoti antioksidantų kompleksai gali per daug pašalinti laisvuosius deguonies radikalus, kurie yra būtini normaliai akrosomos reakcijos eigai ir spermos talpinimui, ir sukelti atkuriamąjį stresą kaip atoveiksmio efektą. Yra duomenų, kad esant antioksidantų pertekliui spermatozoidų branduolinio chromatino dekondensacija padidėja daugiau kaip 20%, o tai, pasak F. Absalano, Y. Menezo ir kt., Lemia įprastą persileidimą. Chromatino struktūros pokyčiai gali sukelti genų ekspresijos pokyčius ir paveikti implantacijos procesą dėl asinchroninės chromosomų kondensacijos, taip pat dėl citoplazmos fragmentų buvimo embrione. Nustatyta, kad ilgalaikis tokio gerai žinomo antioksidanto, kaip askorbo rūgšties, vartojimas ar didelės jo dozės turi labai dviprasmišką reikšmę stimuliuojant spermatogenezę. Vitaminas C, esant hiperdozėms, sunaikina disulfidinius baltymų ryšius, prisidėdamas prie jų denatūracijos, o tai lemia membranos oksidaciją spermatogenezės I ir III fazėse ir netinkamą DNR pakavimą.
Todėl dažnai komerciškai gaminami vaistai yra kompromisas, kai mažas (fiziologiniu požiūriu saugus) antioksidantų dozes kompensuoja daugybė veikliųjų medžiagų, tikėdamiesi jų sinergijos.
Taigi, nepaisant visų antioksidacinės terapijos pranašumų, šios grupės vaistus reikėtų skirti atsargiai, renkantis subalansuotus vaistus, turinčius gerą įrodymų bazę.
Be to, antioksidantai gali būti veiksmingi tik tuo atveju, jei yra ROS perteklius ir vystosi OS. Kadangi OS ne visada yra spermos kokybės pablogėjimo priežastis - 30-80% atvejų, pasak M.G. Showell ir kt. , o mūsų duomenimis, apie 40 proc. - antioksidantų skyrimas vyrų nevaisingumui gydyti atrodo pateisinamas tik šiais atvejais.
Todėl akivaizdu, kad EAU vadove taip pat nerekomenduojama antioksidantų skirti visiems vyrams iš eilės, kuriems yra idiopatinis nevaisingumas. Šiuo metu yra įtikinamų įrodymų, kad vyrai geria geriamuosius antioksidantus tik ruošdami porą vėlesniam apvaisinimui in vitro, o antioksidantų vaidmenį natūralaus apvaisinimo procese dar reikia ištirti.
Remiantis paskutine M. G. Cochrane apžvalga. Showell ir kt. įskaitant 48 tyrimus, kuriuose monoterapiniai ir kombinuoti antioksidantai buvo lyginami su placebu, be gydymo ar kito antioksidanto 4 179 nevaisingų vyrų populiacijoje, antioksidantai greičiausiai bus veiksmingi kaip pregravidinis preparatas nevaisingiems vyrams. Numatomas klinikinis nėštumo lygis nevaisingiems vyrams, nevartojusiems jokių antioksidantų, buvo 6 atvejai iš 100, palyginti su 11–28 atvejais iš 100 vyrų, kurie vartojo antioksidantus. Apžvalgos rezultatai taip pat parodė, kad laukiamas pagyvenusių vyrų placebo grupėje arba negydomas gyvas gimstamumas yra 5 iš 100, palyginti su antioksidantų vartojančiais vyrais - nuo 10 iki 31 iš 100.
Taigi mes parodėme, kad buitinio komplekso „AndroDoz®“ naudojimas po 4 kapsulių per parą dozę po 1,5 mėnesio. gydymas lemia spermos kokybės pagerėjimą - reikšmingas spermatozoidų, turinčių mišrią patologiją ir (arba) DNR fragmentaciją, procentinės dalies sumažėjimas, atsižvelgiant į nuplautų spermatozoidų ROS gamybos sumažėjimą, kuris yra susijęs su OS sunkumo sumažėjimu vyrų lytinės ląstelės.
Vyriškos lyties DNR vientisumas yra nepaprastai svarbus spermos ir kiaušialąstės sąveikai, apvaisinimui ir ankstyvam embriono vystymuisi, o dėl to gauti rezultatai neabejotinai domina praktiką.

išvados

1. Vaistas „AndroDoz®“ gali būti naudojamas gydant idiopatinį vyrų nevaisingumą su OS požymiais ir spermos DNR vientisumo pažeidimais; apie 2/3 pacientų į šią terapiją reaguoja teigiamai pakeisdami spermos kokybę.
2. Šio gydymo fone plaunamų spermatozoidų ROS gamyba žymiai sumažėja, o tai rodo OS sunkumo sumažėjimą vyrų lytinėse ląstelėse.
3. Šio gydymo fone 67% vyrų pastebimai pagerėjo spermos DNR struktūra.
4. Spermogramoje statistiškai reikšmingai sumažėjo mišrią patologiją turinčių spermatozoidų procentas 80% atvejų.
5. 1,5 mėnesio. Gydant AndroDoz®, reikšmingų kitų spermogramos parametrų (tūrio, koncentracijos, progresuojančių judančių ir morfologiškai normalių formų dalių) pagerėjimo nepastebėta; šių parametrų pokyčiai buvo daugialypiai.
6. Tyrimą reikšmingai apribojo kontrolinės grupės nebuvimas, trumpa stebėjimo trukmė ir nėštumo registracijos nebuvimas. Atitinkamai reikia daugiau tyrimų.

Literatūra

1. PSO nevaisingo vyro standartizuoto tyrimo, diagnostikos ir valdymo vadovas. Kembridžas: Kembridžo universiteto leidykla, 2000; 91.
2. Andrologija: vyrų reprodukcinė sveikata ir sutrikimai. 3 d. E. Nieschlag., H. M. Behre, S. Nieschlag (Red.), 2010; 629.
3. Vyrų nevaisingumas / S.J. Parekattil, A. Agarwal (Red.), 2012, Springer; 518.
4. Jungwirth A. (Red.), Diemer T., Dohle G.R. ir kt. Vyrų nevaisingumo gairės. © Europos urologijos asociacija. 2016 m. 42.
5. Sukhikh G. T., Bozhedomov V.A. Vyrų nevaisingumas. Praktinis urologų ir ginekologų vadovas, M.: Eksmo, 2009. 240 p.: Iliustr. Medicininė praktika.
6. Bozhedomov V.A. Vyriškas bevaikės santuokos faktorius - problemos sprendimo būdai. Urologija. 2016. Nr. 1 (1 priedas). S. 28–34.
7. Mirone V. (Red.). Klinikinė Uro-andrologija. Springer; 2015. P. 197–205.
8. Hughes E.G., Grantmyre J., Zini A. Integruotas požiūris į vyro veiksnio subterilumą: atotrūkio tarp vaisingumo specialistų, paruoštų urologijos ir ginekologijos srityje, mažinimas // J Obstet Gynaecol Can. 2015 m. Kovo mėn. T. 37 straipsnio 3 dalis. P. 258-265.
9. Jae Hung Jungas, Ju Tae Seo. Empirinė medicininė terapija sergant idiopatiniu vyrų nevaisingumu: pažadas ar panacėja? // Clin Exp Reprod Med. 2014. T. 41 straipsnio 3 dalis. P. 108–114.
10. Singh A., Jahan N., Radhakrishnan G. ir kt. Kombinuotos antioksidantų terapijos efektyvumui įvertinti oksidacinio streso parametrus sėklinės plazmos vyrų nevaisingumo metu // J Clin Diagn Res. 2016. T. 10 (7). P. 14–17.
11. Garolla A., Ghezzi M., Cosci I. ir kt. FSH gydymas nevaisingiems vyrams, pretenduojantiems į pagalbinį apvaisinimą, pagerino spermos DNR fragmentaciją ir nėštumo rodiklį. Endokrininės sistemos. 2016 m. Liepos 27 d.
12. Simoni M., Santi D., Negri L. ir kt. Gydymas žmogaus rekombinantiniu FSH pagerina idiopatinių nevaisingų vyrų spermos DNR fragmentaciją, atsižvelgiant į FSH receptorių polimorfizmą p.N680S: farmakogenetinis tyrimas // Hum Reprod. 2016 rugsėjo mėn. T. 31 straipsnio 9 dalis. P. 1960-1969 m.
13. Bozhedomov V.A., Toroptseva M.V. Ušakova I.V. ir kt. Reaktyviosios deguonies rūšys ir vyrų reprodukcinė funkcija: pagrindiniai ir klinikiniai aspektai (literatūros apžvalga) // Andrologija ir lytinių organų chirurgija. 2011. Nr. 3. 26–33 p.
14. Zini A., Fischer M. A., Nam R. K. ir kt. Alternatyvių ir hormoninių gydymo būdų vartojimas vyrų nevaisingumui. Urologija 2004. T. 63. P. 141-143.
15. Tremellen K. Oksidacinis stresas ir vyrų nevaisingumas - klinikinė perspektyva. Hum. Reprod. Atnaujinti. 2008. T. 14 straipsnio 3 dalis. P. 243-258.
16. Agarwal A., Sekhon L.H. Oksidacinis stresas ir antioksidantai sergant idiopatine oligoasthenoteratospermija: ar tai pateisinama? // Indijos J Urol 2011. T. 27. P. 74.
17. Sabeti P., Pourmasumi S., Rahiminia T. ir kt. Spermos oksidacinio streso etiologijos. Int J Reprod BioMed 2016. T. 14. P. 231–240.
18. Akmal M., Qadri J.Q., Al-Waili N.S. ir kt. Žmogaus spermos kokybės pagerėjimas išgėrus vitamino C // J Med Food. 2006 m. Ruduo. T. 9 straipsnio 3 dalis. P. 440–442.
19. Ross C., Morriss A., Khairy M. ir kt. Sisteminga geriamųjų antioksidantų poveikio vyrų nevaisingumui apžvalga // Reprod Biomed Online. 2010. T. 20 (6). P. 711-123.
20. Zini A., Al-Hathal N. Antioksidacinė vyrų nevaisingumo terapija: faktas ar prasimanymas? // Azijos J Androl. 2011. T. 13 straipsnio 3 dalis. P. 374-381.
21. Showell M. G., Mackenzie-Proctor R., Brown J. ir kt. Antioksidantai, skirti vyrų nevaisingumui. „Cochrane Database Syst Rev.“ 2014. (12): CD007411. doi: 10.1002 / 14651858.CD007411.pub3. „Epub 2014“ gruodžio 15 d.
22. PSO (2010 m.) PSO žmogaus spermos tyrimo ir apdorojimo laboratorijos vadovas, 5-asis leidimas. PSO, Ženeva.
23. Agarwal A., Deepinder F. Sėklinių oksidatorių (reaktyviųjų deguonies rūšių) nustatymas // Nevaisingumas vyruose, 4-asis ednas (red. L.I. Lipshults, S.S. Howards & C.S. Niederberger), 2009. P. 618–632.
24. Gosalvez J., Lopez-Fernandez C., Fernandez J. L. Spermos chromatindispersijos testas: techniniai aspektai ir klinikiniai pritaikymai // Spermos chromatinas. Biologinės ir klinikinės vyrų nevaisingumo ir pagalbinio apvaisinimo programos. Zini A., Agarwal A. (Red.), Springer. 2011. P. 151-170.
25. Kamalovas A.A., Abojanas I.A., Sitdykova M.E. ir kt. Biologiškai aktyvaus Androdosis® komplekso taikymas pacientams, sergantiems patospermija ir imunologiniu nevaisingumo veiksniu. Daugiacentrinio klinikinio tyrimo rezultatai // Farmateka. 2014. Nr. 4. P. 29–40.
26. Alchinbaev M.K., Medeubekov U.Sh., Khusainov T.E. ir kt. Nauji patospermijos gydymo metodai // Urologija. 2013. Nr. 2. P. 46–49.
27. Dendeberov E.S., Vinogradov I.V. Biokomplekso „AndroDoz“ naudojimo idiopatine patospermija sergančių pacientų apvaisinimo patirtis // Efektyvi farmakoterapija. Nr. 2014. V. 47 (Urologijos ir Nefrologijos Nr. 4). S. 2–3.
28. Proskurin A.A., Golubkin E.A., Polivin P.A., Kazaryan E.E. Idiopatinio nevaisingumo kompleksinės terapijos efektyvumo lyginamasis vertinimas // Reprodukcijos problemos. 2013. Nr. 6. P. 65–66.
29. Neimarkas A.I., Klepikova I.I., Neimarkas B.A. ir kt. Vaisto „AndroDoz“ taikymas sutrikusio vaisingumo vyrams // Andrologija ir lytinių organų chirurgija. 2013. Nr. 4. P. 44–52.
30. Aitken J.R., De Iuliis G.N. Oksidacinio streso vaidmuo spermos DNR pažeidimo etiologijoje // Spermos chromatinas: biologinis ir klinikinis pritaikymas vyrų nevaisingumui ir pagalbiniam apvaisinimui / A. Zini, A. Agarwal (Red.). 2011. Springer. R. 277-294.
31. Agarwal A., Durairajanayagam D., du Plessis D.S. Antioksidantų naudingumas pagalbinio apvaisinimo metodų metu: įrodymais pagrįsta apžvalga // Reprodukcinė biologija ir endokrinologija 2014. t. 12. P. 112.
32. Yao D.F., Millsas J.N. Vyrų nevaisingumas: gyvenimo būdo veiksniai ir holistinė, papildoma ir alternatyvi terapija // Asian Journal of Andrology. 2016. T. 18. P. 410-418.
33. Scott R., MacPherson A., Yates R. W., Hussain B., Dixon J. Geriamojo seleno papildymo poveikis žmogaus spermos judrumui // Br J Urol. 1998. T. 82. P. 76-80.
34. Keskes-Ammar L., Feki-Chakroun N., Rebai T., Sahnoun Z., Ghozzi H., Hammami S. ir kt. Spermos oksidacinis stresas ir geriamojo vitamino E bei seleno papildo poveikis nevaisingų vyrų spermos kokybei // Syst Biol Reprod Med. 2003. T. 49. P. 83–94.
35. Omu A., Al-Azemi M., Kehinde E., Anim J., Oriowo M., Mathew T. Mechanizmų, susijusių su pagerėjusiais spermos parametrais, taikant cinko terapiją, indikacijos // Med Princ Pract. 2008. T. 17. P. 108-116.
36. Galatioto G. P., Gravina G. L., Angelozzi G. ir kt. Ar gali antioksidantų terapija pagerinti vyrų, sergančių nuolatine oligospermija, spermatozoidus po retrogradinės embolizacijos varikocelei? // Pasaulinis urologijos žurnalas. 2008. T. 26. P. 97–102.
37. Lombardo F., Sansone A., Romanelli F. ir kt. Antioksidacinės terapijos vaidmuo gydant vyrų nevaisingumą: apžvalga // Asian Journal of Andrology. 2011. T. 13. P. 690–697.
38. Menezo YJ, Hazout A., Panteix G., Robert F., Rollet J., Cohen-Bacrie P., Chapuis F., Clement P., Benkhalifa M. Antioksidantai, siekiant sumažinti spermos DNR fragmentaciją: netikėtas neigiamas poveikis. // Reprod Biomed Online 2007. T. 14. P. 418–421.
39. Absalan F., Ghannadi A. Spermos chromatino dispersijos testo vertė poroms su nepaaiškinamu pasikartojančiu abortu. J „Reprod Genet“ pagalbininkas 2012. T. 29. P. 11–14.
40. Gharagozloo P., Aitken R. J. Spermos oksidacinio streso vaidmuo vyrų nevaisingume ir geriamosios antioksidantų terapijos reikšmė // Hum Reprod. 2011. T. 26 straipsnio 7 dalis. P. 1628-1640.
41. Lombardo F., Sansone A., Romanelli F., Paoli D., Gandini L., Lenzi A. Antioksidantų terapijos vaidmuo gydant vyrų nevaisingumą: apžvalga // Asian J Androl. 2011. T. 13. P. 690-737.
42. Giustarini D., Dalle-Donne I., Colombo R., Milzani A., Rossi R. Ar askorbatas gali sumažinti disulfido tiltus? // Įspėjamasis užrašas. Azoto oksidas 2008. T. 19. P. 252–258.
43. Menezo Y., Evenson D., Cohen M., Dale B. Antioksidantų poveikis spermos genetinei žalai // Adv Exp Med Biol. 2014. T. 791. P. 173–89. Doi: 10.1007 / 978-1-4614-7783-9_11. Apžvalga. „PubMed PMID“: 23955679.

Nevaisingumas Ar seksualiai aktyvios sutuoktinių poros nesugebėjimas pastoti ilgiau nei vienerius metus, nenaudojant kontracepcijos,

Maždaug 25% sutuoktinių porų per vienerius metus nepastoja. Iš jų 15% gydomi nevaisingumas.

Vyrų veiksnys lemia maždaug 40% nevaisingos santuokos priežasčių; pastaraisiais dešimtmečiais ejakuliatūroje nepaaiškinamai mažėja spermatozoidų skaičius. Maždaug 6–8% vyrų yra nevaisingi. Apie 40% yra moterų nevaisingumas, o 20% - mišrus.

Vyrų nevaisingumo diagnozė:

Vyrų nevaisingumo diagnozė grindžiama visapusišku vyrų reprodukcinės sistemos būklės įvertinimu; andrologas atlieka tyrimą tam tikra seka. Diagnostika pradedama nuo minimumo ir prireikus plečiama.

Minimalus nevaisingo vyro tyrimo algoritmas:(šis algoritmas leidžia patikrinti diagnozę ir nustatyti vyrų apvaisinimo pažeidimus, leidžia įvertinti reprodukcinės sistemos organų anatominę ir funkcinę būklę).

1. Andrologo konsultacija (anamnezės, skundų rinkimas) ir tyrimas.

2. Spermogramos rodiklių įvertinimas - įvertinkite vyrų vaisingumą (spermos kokybę). Tai yra tolesnių veiksmų poreikio atspirties taškas (analizė atliekama masturbuojant atskirame kambaryje, prieš tai 3 dienos susilaikius nuo lytinių santykių, nevartokite alkoholio, neikite į pirtį). Patospermijos tipai.

3. MAR tyrimas - neįtraukite imuninio nevaisingumo (preparatas yra toks pat, kaip ir atliekant spermogramą).

4. Ultragarsas + kapšelio organų doplerometrija - sėklidžių, priedų ir šių organų aprūpinimo krauju tyrimas. Pašalina chirurginę, uždegiminę ir fiziologinę patologiją.

5. Prostatos ir sėklinių pūslelių TRUS - išsamesnis prostatos liaukos tyrimas, leidžiantis ištirti jo struktūrą ir neįtraukti ūmių ir lėtinių uždegiminių procesų.

Visas nevaisingo vyro tyrimo algoritmas:(atliekamas atlikus minimalų algoritmą, siekiant išaiškinti diagnozę arba esant paciento nusiskundimams).

1. Hormoninė būklė - pagrindinių hormonų, atsakingų už normalią spermatogenezės eigą ir vyrų libido, kraujo tyrimas.

2. Genetiniai tyrimai - atliekami pagal andrologo receptą, atsižvelgiant į klinikinę situaciją (tiesioginė tyrimo indikacija yra ryški patospermija).

3. PGR - LPL infekcijų diagnozė - neįtraukite pagrindinių lytiniu keliu plintančių infekcijų ir jų galimo poveikio spermos kokybės pablogėjimui ir pastojimo nebuvimui, persileidimui ar nėštumo užšalimui (tepinėlis iš šlaplės, nešlapinkite likus 2 valandoms iki tyrimo) ).

4. Spermos pasėlis - ejakuliato tyrimas atliekamas padidėjus leukocitų kiekiui ar atsiradus bakterijoms spermoje (analizė atliekama masturbuojant steriliame inde, susilaikyti nereikia).

5. Prostatos sultys - (prostatos paslaptis) - pašalina uždegiminį procesą prostatos liaukoje - prostatitas (prieš analizę reikia 3 dienų seksualinio susilaikymo).

6. Laisvųjų radikalų (ROS) lygio nustatymas - vienas iš veiksnių, galinčių sumažinti vyrų vaisingumą ROS - reaktyviųjų deguonies rūšių (ozono, laisvųjų radikalų, vandenilio peroksido) hiperprodukcija. Normaliam spermos funkcijos reguliavimui (hiperaktyvacijai ir akrosomų atsakui) reikalingi nedideli ROS kiekiai. Tačiau per didelė ROS gamyba pažeidžia spermos membraną, sumažėja jų judrumas ir sutrinka apvaisinimo gebėjimai. Be to, ROS tiesiogiai pažeidžia chromosomų DNR ir inicijuoja spermos apoptozę.

7. Akrosominė reakcija (tai yra cheminiai spermos galvos pokyčiai, leidžiantys jai patekti į kiaušinį) - kai spermatozoidai liečiasi su permatoma kiaušinio membranos sritimi, spermos akrosoma patiria akrosomą. reakcija, kuri paprastai įvyksta tik morfologiškai normaliuose spermatozoiduose ir leidžia jiems prasiskverbti į kiaušialąstes ...

8. Spermatozoidų elektroninis mikroskopinis tyrimas (NAUJAS) - naujas metodas, skirtas išsamesniam spermatozoidų vidinių struktūrų ir sėklinės plazmos turinio tyrimui ir nustatymui.

9. Ejakuliato biochemija - sėklinės plazmos sudėties tyrimas atspindi tokių organų kaip prostatos, sėklinių pūslelių ir epididimio darbą. (ištirti fruktozės, citrinos rūgšties, neutralios alfa - glikozidazės, prostatos rūgšties fosfatazės, cinko kiekį).

10. Morfologijos tyrimas pagal Krugerį - nuodugnesnis spermatozoidų morfologijos tyrimas atliekant įprastą spermogramą (atliekamą kartu su spermograma). Atvirkštinė spermograma - ji apima standartinę spermogramą (PSO rekomenduojamus rodiklius) + MAR testą (IgG; IgA) + Krugerio morfologiją.

11. Kurzrocko-Millerio testas; Šuvarskio testas - imunologinio vyro ir moters konflikto nustatymas gimdos kaklelio lygyje (gimdos kaklelio faktorius, postkoitalinis testas).

12. HLA - susituokusios poros tipavimas (jei nėra nėščia). Jis atliekamas siekiant nustatyti sutuoktinių audinių suderinamumo antigenus. Paimamas veninis kraujas ir iš jo išskiriamos leukocitų ląstelės, kurių paviršiuje yra audinių suderinamumo antigenai.

13. Diagnostinė sėklidžių biopsija - atliekama pagal andrologo nurodymą, tais atvejais, kai yra azoospermija (būtina tiksliai diagnozuoti ir pasirinkti tolesnę gydymo taktiką).

14. PSA - prostatos specifinis antigenas, tyrimas atliekamas visiems vyresniems nei 45 metų vyrams.

15. Laboratoriniai diagnostikos metodai - paskiria gydytojas pagal indikacijas: bendra šlapimo analizė, šlapimo pasėlis, bendras kraujo tyrimas, kraujo biochemija ir kt.

16. Naviko žymenų nustatymas - paskyrimą atlieka gydytojas pagal indikacijas.

Spermatozoidų oksidacinio streso priežastys(AFC \ ROS testas)

Reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) arba reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) yra deguonies metabolitai, įskaitant superoksido anijoną, vandenilio peroksidą, hidroksilo ir hidroperoksilo radikalus ir azoto oksidą.

Kai ROS yra per daug spermoje, jie gali inicijuoti patologinius spermos pokyčius, sukeldami oksidacinį ląstelių lipidų, baltymų ir DNR pažeidimą. Tokie sutrikimai vadinami spermos oksidaciniu stresu (OS).

Dėl mobilumo sumažėjimo, akrosomos reakcijos pažeidimo, spermos receptorių pažeidimo OS sumažėja nėštumo tikimybė. Sukeldamas spermos DNR lūžius (suskaidymą), OS lemia sutrikusį embriono vystymąsi, kurį lydi sustingęs nėštumas, ankstyvi persileidimai, vystymosi anomalijos ir piktybinių navikų atsiradimas vaikams.

H Žmogaus sperma yra labai jautri oksidaciniam stresui.

Spermos OS daro neigiamą įtaką tiek natūralaus apvaisinimo prognozei, tiek pagalbinio apvaisinimo technologijų (ART) rezultatams, t. ICSI.

Remiantis Pasaulio sveikatos organizacijos (PSO-2010), Europos žmogaus reprodukcijos ir embriologijos asociacijos (ESHRE-2016) ir Europos urologų asociacijos (EAU-2017) rekomendacijomis, ROS apibrėžimas yra įtrauktas į rekomenduojamų medžiagų sąrašą. vyrų nevaisingumo ir nėštumo raidos sutrikimų tyrimo metodai.

Analizuoja	Kaina
Reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba vietinėse spermose	1355	Susitarti dėl susitikimo
Reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba plaunant spermą	2678	Susitarti dėl susitikimo
Spermos formazanų kiekio įvertinimas	2000	Susitarti dėl susitikimo
Spermos antioksidacinis aktyvumas	2142	Susitarti dėl susitikimo

F Spermos oksidacinis stresas pasireiškia 30-80% (mūsų duomenimis, apie 40%) bevaikių santuokų atvejų.

Spermos OS rizikos veiksnių yra daug:

Infekciniai ir uždegiminiai procesai urogenitalinio trakto organuose;

Varikocelė;

Kriptorchidizmas;

Perkaitimas esant karštligiškoms sąlygoms arba veikiant išoriniams šilumos šaltiniams (sauna, karšta vonia ir kt.);

Psichoemocinis stresas;

Autoimuninės reakcijos prieš spermą, kartu su antisperminių antikūnų (ASAT) gamyba;

Sisteminės ligos (diabetas, podagra ir kt.);

Rūkymas;

Amžius virš 40;

Antioksidantų trūkumas maiste;

Antioksidacinės gynybos sistemos genetiniai defektai.

Norint įvertinti spermatozoidų OS, atliekant mokslinius tyrimus, gali būti naudojami įvairūs tyrimai: tiesioginiai ROS nustatymo metodai (chemiliuminescencija, NBT testas) arba netiesioginiai metodai, skirti įvertinti OS sukeliamą žalą (izoprostano, maloninio aldehido nustatymas ir kt.).

Vienintelis oksidacinio streso įvertinimo metodas, kurį PSO-2010 rekomenduoja klinikiniais tikslais, yra nuo liuminolio priklausomas chemiliuminescencijos metodas, kurį mes naudojame.

Šioje procedūroje naudojamas jautrus luminometras, skirtas matuoti nedidelius žmogaus spermos generuojamos šviesos kiekius, esant chemiliuminescenciniam zondui, tokiam kaip luminolis. PSO 2010 m. Gairėse aprašyta ir mūsų naudojama metodika pagrįsta luminolio ir krienų peroksidazės mišinio naudojimu atliekant jautrius vandenilio peroksido gamybos matavimus.

Įvairių pacientų ejakuliato nuo liuminolio priklausomos chemiliuminescencijos registravimo pavyzdžiai

(I-IV kreivės).

Žmogaus ejakuliacijoje ROS gamina spermatozoidai, nesubrendusios spermatogenezės ląstelės ir leukocitai. Viena baltoji kraujo ląstelė gali generuoti mažiausiai 100 kartų daugiau ROS nei spermatozoidai.

Įvertinant leukocitų funkcinį aktyvumą ir tiesiogiai spermos OS, naudojamos įvairios metodo modifikacijos.

Mūsų laboratorijoje šiuo metu naudojami trys OS vertinimo metodai, pagrįsti chemiliuminescencija:

- ROS nustatymas gimtajame ejakuliate, kuris atspindi bendrą ROS gamybą, kuri daugiausia priklauso nuo leukocitų koncentracijos ir uždegiminio proceso aktyvumo;

- nuplautų spermatozoidų ROS gamybos įvertinimas (10 milijonų ląstelių), kuris atspindi viduląstelinės OS sunkumą;

- sėklinės plazmos antioksidacinio pajėgumo nustatymas, kuris yra antioksidantų paskyrimo pagrindas.

Sėklų plazma gali surišti perteklinę ROS gamybą, tačiau kai kuriems vyrams antioksidacinių fermentų aktyvumas gali būti nepakankamas. Spermos antioksidaciniam pajėgumui apibūdinti naudojama speciali technika naudojant geležies sulfatą.

Cheminės liuminescencijos registravimas modelio sistemoje, generuojančioje ROS (kreivė M) ir modelinėje sistemoje, generuojančioje ROS, pridedant 0,1 ml spermos plazmos iš I, II, III, IV pacientų (I-IV kreivės).

Dr. Med. Mokslai, profesorius V.A.Bozhedomovas

Keletas reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS / ROS) vaidmens:

- "... Didelė ROS gamyba gali sukelti peroksido pažeidimus ir spermos funkcijos praradimą, taip pat DNR pažeidimą tiek branduolio, tiek mitochondrijų genomuose ..."

pateikė PSO laboratorijos žmogaus spermos tyrimo ir apdorojimo vadovas / vyriausiasis redaktorius Dr. Trevoras G. Cooperis - 5-asis leidimas. 2010: 132.

- "... Oksidacinis stresas yra viena iš pagrindinių spermos DNR pažeidimų priežasčių ..."

Pasak C. Celik-Ozenci, G. Huszar // Vyrų nevaisingumas. S. J. Perekatti, A. Agarwalas (Red.). „Springer“ Niujorko „Heidelberg Dordrecht“ Londonas, 2012: 462.

- "... Manoma, kad nuo 30% iki 80% vyrų nevaisingumo atvejų yra susiję su žalingu oksidacinio streso poveikiu spermatozoidams, o 1 iš 20 žmonių kenčia nuo nevaisingumo ..."

- "... Padidėjęs ROS, susijęs su leukocitospermija, gali pažeisti ląstelių membranas, tarpląstelinius baltymus, organelius ir spermos DNR ..."

Pasak Smelovo V. // Prostatitas ir jo valdymas. T. Cai, T. E. B. Johansenas (Red.) - „Springer Cham Heidelberg“ Niujorko „Dordrecht“ Londonas, 2016: 123.

Šiame apžvalgos straipsnyje nagrinėjamas dabartinis supratimas apie mechanizmus, kuriais grindžiama reaktyviųjų deguonies rūšių susidarymas mitochondrijų membranų pralaidumo metu. Apsvarstomas kalcio jonų ir mitochondrijų kvėpavimo grandinės kompleksų vaidmuo. Aptariama piridino nukleotidų, antioksidacinės sistemos komponentų, taip pat matricos Ca2 + -aktyvintų dehidrogenazių dalyvavimo įtaka. Literatūroje yra duomenų, rodančių, kad mitochondrijų nuo Ca2 + priklausomų porų indukcija sukelia I, II ir III kvėpavimo kompleksų konformacinius pertvarkymus, o tai padidina reaktyviųjų deguonies rūšių susidarymą. Kalcio patekimas į mitochondrijų matricą gali padidinti reaktyviųjų deguonies rūšių gamybos greitį dėl piruvato dehidrogenazės ir a-ketoglutarato dehidrogenazės aktyvacijos, taip pat palengvinti citochromo c išsiskyrimą į citozolį, sužadinus mitochondrijų poras. Glutationo ir redukuotų piridino nukleotidų išsiskyrimas per poras sumažina antioksidacinę mitochondrijų matricos apsaugą ir padidina superoksido anijono ir vandenilio peroksido gamybą. Reaktyviųjų deguonies rūšių sprogimo, kurį sukelia mitochondrijų pralaidumas, reiškinys lydi įvairias patologines sąlygas, įskaitant išemiją, po kurios įvyksta reperfuzija; todėl norint suprasti tolesnius jo farmakologinės korekcijos metodus būtina suprasti jo pagrindinius molekulinius procesus.

reaktyviosios deguonies rūšys

mitochondrijų poros

mitochondrijų kvėpavimo grandinė

1. Halestrap A.P., Richardson A.P. Mitochondrijų pralaidumo perėjimas: dabartinė jo tapatybės ir vaidmens išemijos / reperfuzijos pažeidimo perspektyva // Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 2015. T. 78. P. 129-141.

2. Brookes P.S., Yoon Y., Robotham J.L. ir kt. Kalcis, ATP ir ROS: mitochondrijų meilės ir neapykantos trikampis // American Journal of Physiology. Ląstelių fiziologija. 2004. T. 287 straipsnio 4 dalis. P. 817-833.

3. Ruiz-Ramírez A., López-Acosta O., Barrios-Maya M. A., El-Hafidi M. Ląstelių mirtis ir širdies nepakankamumas nutukime: baltymų atjungimo vaidmuo // Oksidacinė medicina ir ląstelių ilgaamžiškumas. 2016. T. 2016. P. 1-11.

4. Zorov D.B., Juhaszova M., Sollott S.J. Mitochondrijų reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) ir ROS sukeltas ROS išsiskyrimas // Fiziologinės apžvalgos. 2014. T. 94 straipsnio 4 dalis. P. 909–950.

5. Andrienko T., Pasdois P., Rossbach A., Halestrap A.P. Realaus laiko ROS ir išeminės / reperfuzinės žiurkės širdies fluorescencijos matavimai: aptinkamas padidėjimas įvyksta tik atidarius mitochondrijų poras ir susilpninamas išeminiu išankstiniu kondicionavimu // PLoS ONE. 2016. T. 11 (12).

6. Korge P., John S.A., Calmettes G., Weiss J.N. Reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba, kurią sukelia porų atidarymas širdies mitochondrijose: II komplekso vaidmuo // The Journal of Biological Chemistry. 2017. T. 292 (24). P. 9896-9905.

7. Korge P., Calmettes G., John S.A., Weiss J.N. Reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba, kurią sukelia porų atidarymas širdies mitochondrijose: III komplekso vaidmuo // The Journal of Biological Chemistry. 2017. T. 292 (24). P. 9882-9895.

8. Batandier C., Leverve X., Fontaine E. Mitochondrijų pralaidumo perėjimo porų atidarymas sukelia kvėpavimo grandinės komplekso I reaktyviųjų deguonies rūšių gamybą // The Journal of Biological Chemistry. 2004. T. 279 (17). P. 17197-17294.

9. Cadenas S. ROS ir redokso signalizavimas miokardo išemijos reperfuzijos sužalojimo ir kardioprotekcijos metu // Laisvoji radikinė biologija ir medicina. 2018. t. 117. P. 76–89.

10. Chouchani E. T., Pell V. R., James A. M. ir kt. Vienijantis mitochondrijų superoksidų gamybos mechanizmas išemijos-reperfuzijos pažeidimo metu // Ląstelių metabolizmas. 2016. T. 23 straipsnio 2 dalis. P. 254–263.

11. Grivennikova V.G., Vinogradov A.D. Reaktyviųjų deguonies rūšių generavimas mitochondrijomis // Biologinės chemijos pažanga. 2013. 53 t., 245-296.

12. Maklashina E., Sher Y., Zhou H.Z. ir kt. Anoksijos / reperfuzijos poveikis grįžtamam aktyviam / nedeaktyviam NADH-ubiquinone oxidoreductase (I kompleksas) perėjimui žiurkių širdyje // Biochimica et Biophysica Acta. 2002. T. 1556 straipsnio 1 dalis. P. 6-12.

13. Grivennikova V.G., Kareyeva A.V., Vinogradov A.D. Kokie yra vandenilio peroksido gamybos mitochondrijose šaltiniai? // Biochimica et Biophysica Acta. 2010. T. 1797 (6–7). P. 939–944.

14. Chouchani E.T., Methner C., Nadtochiy S.M. ir kt. Širdies apsauga C-ceino jungiklio S-nitrozavimu I mitochondrijų komplekse // Gamtos medicina. 2013. T. 19 straipsnio 6 dalis. P. 753-759.

15. Imlay, J.A. Metabolinis fermentas, kuris greitai gamina Escherichia coli superoksidą, fumarato reduktazę // Journal of Biological Chemistry. 1995. T. 270. P. 19767-19777.

16. Siebels I., Drose S. Q vietos inhibitoriaus sukelta II mitochondrijų komplekso ROS gamyba susilpnėja TCA ciklo dikarboksilatais // Biochimica et Biophysica Acta. 2013. T. 1827 (10). P. 1156-1164.

17. Quinlan C.L., Orr A.L., Perevoščikova I.V. ir kt. Mitochondrijų II kompleksas gali generuoti reaktyvias deguonies rūšis dideliu greičiu tiek pirmyn, tiek atgaline reakcija // Journal of Biological Chemistry. 2012. T. 287 (32). P. 27255-27264.

18. Grivennikova V.G., Kozlovsky V.S., Vinogradov A.D. Kvėpavimo sistemos II kompleksas: ROS gamyba ir ubiquinono redukcijos kinetika // Biochimica et Biophysica Acta. 2017. T. 1858 (2). P. 109–117.

19. Chouchani E. T., Pell V. R., Gaude E. ir kt. Išeminis sukcinato kaupimasis kontroliuoja reperfuzijos pažeidimą per mitochondrijų ROS // Gamta. 2014. T. 515. p. 431–435.

20. Lemarie A., Huc L., Pazarentzos E. ir kt. Specifinis II komplekso sukcinato skilimas: ubikinono oksidoreduktazė susieja pH pokyčius su oksidaciniu stresu apoptozės indukcijai // Ląstelių mirtis ir diferenciacija. 2011. T. 18 straipsnio 2 dalis. P. 338-349.

21. Huang L.S., Cobessi D., Tung E.Y., Berry E.A. Kvėpavimo grandinės inhibitoriaus antimicino susiejimas su mitochondrijų bc1 kompleksu: nauja kristalų struktūra atskleidžia pakitusį tarpmolekulinį vandenilio jungimosi modelį // Journal of Molecular Biology. 2005. T. 351 straipsnio 3 dalis. P. 573–597.

22. Vercesi A.E. NADP, transmembraninio potencialo ir su energija susijusios NAD (P) transhidrogenazės dalyvavimas Ca2 + ištekėjimo iš žiurkių kepenų mitochondrijų procese // Biochemijos ir biofizikos archyvai. 1987. T. 252 straipsnio 1 dalis. P. 171–178.

23. Peng T.I., Jou M.J. Oksidacinis stresas, kurį sukelia mitochondrijų kalcio perteklius // Niujorko mokslų akademijos metraštis. 2010. T. 1201. P. 183-188.

24. Starkovas A.A. Mitochondrijų α-ketoglutarato dehidrogenazės vaidmens oksidaciniame strese atnaujinimas // Molecular and Cellular Neuroscience. 2013. T. 55. P. 13-16.

25. Nikelis A. G., von Hardenbergas A., Hohlas M. ir kt. Mitochondrijų transhidrogenazės pakeitimas sukelia oksidacinį stresą esant širdies nepakankamumui // Ląstelių metabolizmas. 2015. T. 22 straipsnio 3 dalis. P. 472-484.

26. Wei AC, Liu T., Winslow RL, O "Rourke B. Matricos neturinčio Ca2 + dinamika širdies mitochondrijose: du Ca2 + įsisavinimo komponentai ir fosfatų buferio vaidmuo // Journal of General Physiology. 2012. T. 139 (6) p. 465-478.

27. Dentonas R.M. Mitochondrijų dehidrogenazių reguliavimas kalcio jonais // Biochimica et Biophysica Acta. 2009. T. 1787 (11). P. 1309-1316.

28. Patterson S. D., Spahr C. S., Daugas E. ir kt. Baltymų, išleistų iš mitochondrijų, praeinančių pralaidumo perėjimą, masių spektrometrinis identifikavimas // Ląstelių mirtis ir diferenciacija. 2000. T. 7 straipsnio 2 dalis. P. 137–144.

29. Ott M., Robertson J. D., Gogvadze V. ir kt. Citochromo c išsiskyrimas iš mitochondrijų vyksta dviem etapais. // Jungtinių Amerikos Valstijų Nacionalinės mokslų akademijos darbai. 2002. T. 99 straipsnio 3 dalis. P. 1259-1263.

30. Pereverzevas M.O., Vygodina T.V., Konstantinovas A.A., Skulačiovas V.P. Citochromas c, idealus antioksidantas // Biochemical Society Transactions. 2003. T. 31. Pt. 6. P. 1312-1315.

Mitochondrijų išorinės membranos pralaidumas apibrėžiamas kaip staigus jos pralaidumo padidėjimas jonams ir tirpalams, sveriantiems mažiau nei 1,5 kDa, dėl kurio prarandamas membranos potencialas, patinsta mitochondrijos, plyšta jų išorinė membrana ir išsiskiria apoptogeniniai veiksniai. Šis procesas vyksta atidarius megakanalį, žinomą kaip nuo Ca 2+ priklausomos nespecifinės mitochondrijų poros (mPTP). Atrodo, kad mPTP atidarymas yra pagrindinis veiksnys, sukeliantis ląstelių mirtį ir negrįžtamus organų pažeidimus daugeliu patologinių būklių, tokių kaip išemija, po kurios įvyksta reperfuzija, neurodegeneracinės ligos ir raumenų distrofija.

Kalcis yra pagrindinis mPTP aktyvatorius, o jautrumas katijonui oksidacinio streso metu padidėja. Tokios sąlygos pastebimos išemijos / reperfuzijos metu ir manoma, kad tai yra pagrindinis mPTP atidarymo sukėlėjas. Daroma prielaida, kad pagrindinis reaktyviojo deguonies rūšių (ROS) pliūpsnis atsiranda atidarius poras ir po jų, jau seniai abejojama, nes yra žinoma, kad jo indukcija lemia mitochondrijų atsiejimą, o tai savo ruožtu sumažina fosforo gamybą. ROS. Tačiau D. Zorovo grupė nustatė, kad ROS kaupimasis širdies miocitų mitochondrijų matricoje, fotoaktyvavus tetrametilrhodamino darinius, sukelia mPTP indukciją, o kartu yra daugkartinė padidėjusi ROS gamyba („sprogimas“). Autoriai šį reiškinį pavadino ROS sukeltomis ROS releas (RIRR). Vėliau pasirodė daug tyrimų, įrodančių ROS sprogimą, kurį sukelia mPTP indukcija. ROS išsiskyrimas į citozolį gali suaktyvinti redoksui jautrius fermentus, taip pat sukelti kompleksinį signalinį atsaką ir ROS susidarymą kaimyninėse mitochondrijose. Šis procesas turi didelę fiziologinę ir patologinę reikšmę, nes gali sukelti ne tik senų ir pažeistų mitochondrijų ir ląstelių, bet ir sveikų mirtį. Klausimas apie ROS susidarymo kelius mPTP indukcijos metu turi didelę mokslinę ir praktinę reikšmę, tačiau iki šiol yra atviras.

Tyrimo tikslas

Apžvelgti šiuolaikinėje literatūroje esančius duomenis ir hipotezes apie ROS gamybos vietas ir mechanizmus išorinės mitochondrinės membranos pralaidumo metu.

Mitochondrijų kvėpavimo grandinės I kompleksas

I kompleksas (NADH-ubiquinone oxidoreductase) yra viena iš pagrindinių ROS gamybos vietų mitochondrijose. Manoma, kad pagrindinės ROS susidarymo vietos joje yra flavino mononukleotido NADH surišimo vieta (I f vieta) ir ubisemiochinono kofermento Q prisijungimo vieta (I q vieta). Superoksido gamyba I f vietoje vyksta tiesioginio elektronų pernašos metu, kai FMN yra labai sumažintos būsenos ir priklauso nuo NADH / NAD + santykio matricoje. Koenzimo Q surišimo vietos rotenono inhibitorius padidina superoksido gamybą, nes tai sukelia elektronų grįžimą į FMN. Superoksido gamyba I komplekse taip pat vyksta atvirkštinio elektronų pernašos metu, kai visiškai atkuriamas kofermento Q telkinys.

Esant patologinėms sąlygoms, I komplekso ROS generuojančių vietų efektyvumo padidėjimas gali būti siejamas su jo konformaciniais pertvarkymais. Atidarius mPTP, stipriai sumažėja jautrumas rotenonui NADH-ubichinono reduktazės aktyvumas ir padidėja H2O2 gamyba esant ≥50 µM NADH. NADH-ubiquinone oxidoreductase būdingas lėtas perėjimas iš aktyvios būsenos į neaktyvią būseną ir atvirkščiai. Tai rodo didelius kompleksinius konformacinius pertvarkymus, bent jau tą jo dalį, kuri yra susijusi su jautriai rotenonui ubiquinono redukcijai. Buvo įrodyta, kad I kompleksas, izoliuotas nuo žiurkių, kurioms buvo atlikta 30 minučių anoksinė perfuzija, širdies, persijungė į neaktyvią būseną ir po pakartotinio prisodrinimo grįžo į aktyvią. Autoriai pasiūlė, kad šie konformaciniai pertvarkymai gali būti siejami su ROS generavimu po to, kai širdies audiniai, kuriems taikoma vainikinių kraujagyslių okliuzija, yra deguonimi. Komplekso perėjimą į neaktyvią būseną lydi specifinis Cys39 ND3 subvieneto demaskavimas. Įrodyta, kad nitrozuojantys junginiai, grįžtamai modifikuojantys šį cisteiną, gali būti naudojami kaip farmakologinė apsauga nuo ROS susidarymo reperfuzijos metu.

Mitochondrijų kvėpavimo grandinės II kompleksas

II kompleksas arba sukcinato-ubichinono oksidoreduktazė yra vidinės mitochondrijų membranos tetramerinis flavoproteinas, turintis geležies ir sieros klasterius. Jis vienu metu dalyvauja Krebso ciklo ir kvėpavimo grandinės darbe, vykdydamas sukcinato virsmą fumaratu ir redukuodamas ubiquinoną į ubiquinolį.

Pirmiausia šiame darbe buvo parodyta E. coli fumarato reduktazės flavino (II f vieta) susidarymo galimybė esant mažoms dikarboksirūgščių koncentracijoms. Vėliau buvo įrodyta galvijų širdies mitochondrijų ir griaučių raumenų mitochondrijų dalelių ROS gamyba. II komplekso inhibitorius atpeninas A5 ir III komplekso inhibitorius stigmatelinas, blokuojantis ubiquinolio oksidaciją III kompleksu, stimuliuoja ROS gamybą II kompleksu esant sukcinatui. Kita vertus, malonatas slopina ROS susidarymą II kompleksu, o tai rodo, kad ROS susidaro visiškai redukuotoje II f flavino vietoje, nors kitos vietos nėra atmestos. Vandenilio peroksido gamybos priklausomybė nuo sukcinato koncentracijos turi varpo formą: peroksido lygis padidėja, padidėjus substrato koncentracijai iki 400 μM, tada žymiai sumažėja, kai milimolinė koncentracija paprastai naudojama mitochondrijoms energizuoti. Šio reiškinio priežastis yra ta, kad II kompleksas ROS generuoja tik tada, kai jo II f flavino vietoje nėra dikarboksirūgščių. Sukcinatas ir kiti Krebso ciklo tarpiniai produktai, kurie sąveikauja su dikarboksirūgščių jungimosi vieta, gali apriboti deguonies prieigą prie jo ir taip slopinti ROS gamybą II kompleksu. Išchemijos / hipoksijos metu matricoje padidėja sukcinato ir fumarato lygis, tačiau tai netrukdo susidaryti ROS. Priešingai, nustatyta, kad sukcinato kaupimasis išemijos metu stipriai koreliuoja su ROS gamyba ir reperfuzijos pažeidimais. Autoriai teigė, kad pagrindinis ROS šaltinis šiomis sąlygomis yra elektronų atgalinis srautas per I kompleksą. Tačiau užsitęsusios išemijos sąlygomis, kai membranos yra visiškai depoliarizuotos, šis mechanizmas sunkiai įmanomas. Alternatyvus ROS susidarymo mechanizmas apima deguonies patekimą į redukuotą II f vietą dėl dikarboksirūgščių kiekio sumažėjimo jo artimiausioje aplinkoje dėl pagreitinto sukcinato ir fumarato išsiskyrimo iš matricos indukavus mPTP. Šiam mechanizmui reikia slopinti II kompleksą ubiquinono redukcijos lygiu arba slopinti ubiquinolio oksidaciją III kompleksu.

II komplekso konformaciniai pertvarkymai taip pat gali prisidėti prie ROS sprogimo membranos pralaidumo metu. Buvo įrodyta, kad apoptozės metu pastebėjus ląstelės pH sumažėjimą, įvyksta II komplekso disociacija: sukcinato dehidrogenazės SDHA ir SDHB subvienetai, kurie oksiduoja sukcinatą iki fumarato ir perneša elektronus per geležies ir sieros grupes, yra atskirti nuo redukcijos vietos kofermento Q sukcinato CoQ oksidoreduktazės (SQR) Tai slopina SQR aktyvumą, o sukcinato dehidrogenazės aktyvumas išlieka normalus. Dėl šios disociacijos II komplekso geležies ir sieros klasteris tiesiogiai deguonį redukuoja vienu elektronu. Nors yra žinoma, kad žemas pH yra mPTP inhibitorius, vis dėlto šis ROS padidėjimo mechanizmas gali atsirasti išemijos metu, kai sumažėja pH. Šiuo metu gali įvykti II komplekso konformaciniai pertvarkymai, o vėliau, atliekant reperfuziją, kai pH atstatomas iki pradinio lygio, atsiveria mPTP ir stebimas ROS sprogimas, atsirandantis ant disocijuoto komplekso.

Mitochondrijų kvėpavimo grandinės III kompleksas

III kompleksas (ubiquinol-citochromas nuo oksidoreduktazė) yra dar viena galima ROS susidarymo vieta. Šis baltymas vykdo elektronų perdavimą iš ubiquinono į citochromą nuo veikiant vadinamajam Q ciklui. Vykstant šiam procesui susidaro nestabilus semichinonas, kuris gali pernešti elektroną į deguonį, tuo pačiu formuodamas superoksido radikalą. Tačiau normaliomis sąlygomis tokia reakcija yra mažai tikėtina, nes semochinonas greitai oksiduojamas citochromo b. Staigus superoksido kiekio padidėjimas įvyksta, kai kompleksą slopina antimicinas A, taip pat esant išemijai, trunkančiai daugiau nei 30 minučių. Viena iš šio reiškinio priežasčių gali būti jo konformaciniai pertvarkymai, atsirandantys dėl inhibitoriaus prisijungimo. Izoliuotose širdies mitochondrijose buvo įrodyta, kad III kompleksas, kurį slopina antimicinas A, sukuria reikšmingą kiekį ROS esant Mg 2+ ir NAD + ir be egzogeninių substratų, indukuojant mPTP kalciu ir alameticinu. Autoriai parodė, kad esant šioms sąlygoms, vandenilio peroksido gamyba reiškia nuo Mg 2+ priklausomą NADH susidarymą malato dehidrogenazės būdu. H 2 O 2 gamybą slopino stigmatelinas ir piricidinas, o tai rodo nuo NADH priklausomo ubiquinono redukcijos svarbą ROS susidarymui šiomis sąlygomis. Šie duomenys patvirtina hipotezę, kad išemijos metu, indukavus mPTP, padidėjus Mg 2+, NAD + koncentracijai matricoje, aktyvuojama malato dehidrogenazė, kuri atkuria NAD + naudojant malatą, kurio koncentracija padidėja dėl padidėjusio sukcinato ir fumarato lygiai. Susigrąžinti ekvivalentai patenka į slopinamą III kompleksą, dėl kurio atsiranda ROS šuolis.

Vaidmuo piridino nukleotidai ROS kartoje

Anksčiau buvo įrodyta, kad NAD (P) H matricos oksidacija mitochondrijose vyksta prieš mPTP atidarymą. Be to, dėl porų indukcijos piridino nukleotidai nuteka į ląstelės citozolį. Šis NAD (P) H balanso pokytis turėtų paveikti ROS gamybą mitochondrijų pralaidumo metu. ROS susidarymo priklausomybę nuo NADH koncentracijos tyrė A. Vinogradovo grupė. Buvo įrodyta, kad maksimali superoksido gamyba pasiekia maksimumą, kai NADH koncentracija yra 10-50 μM, o esant milimolinėms koncentracijoms, radikalo gamyba yra slopinama. Kadangi fiziologinės NADH / NAD + matricos porų koncentracijos yra milimoliniame diapazone, I komplekso indėlis į ROS susidarymą normaliomis sąlygomis gali būti nereikšmingas. Nustatyta, kad pralaidžiose mitochondrijose yra didelis, priklausomai nuo santykio NAD (P) N / NAD (P) + ir stimuliuojamas amonio jonų, H2O2 gamyba. Tuo pat metu vandenilio peroksido išeiga buvo nejautri dikumaroliui (NADH-chinono oksidoreduktazės inhibitoriui) ir NADH-OH (I komplekso inhibitoriui), o tai rodo H 2 O 2 generuojančios vietos matricos lokalizaciją. Tiriamas baltymas turėjo NADH: lipoamido oksidoreduktazės aktyvumą ir buvo identifikuotas kaip dihidrolipoamido dehidrogenazė. Šis baltymas yra svarbus dviejų FAD turinčių mitochondrijų fermentų komponentas (vadinamasis E3 komponentas): α-ketoglutarato dehidrogenazės kompleksas ir piruvato dehidrogenazės kompleksas. Remiantis gautais duomenimis apie išgrynintus kompleksus ir izoliuotas mitochondrijas, E3 komponentas yra atsakingas už superoksido ir vandenilio peroksido gamybą. Įrodyta, kad dėl permeabilizuotų žiurkių širdies mitochondrijų, oksiduojančių NADH, dėl I komplekso susidaro apie 50% vandenilio peroksido, o likę 50% yra dihidrolipoamido dehidrogenazė.

Sumažėjusios piridino nukleotidų formos ne tik tiekia elektronus į mitochondrijų kvėpavimo grandinę, bet ir reguliuoja matricos redoksinę būseną pro- ir antioksidaciniais baltymais. Vienas iš šių baltymų yra glutationas, kuris kartu su NADPH yra antioksidacinių baltymų - glutationo peroksidazės ir glutationo reduktazės - substratas. Atidarius mPTP, gali išsiskirti NADPH ir glutationas, dėl kurio kaupiasi Н 2 О 2. Be to, esant šioms sąlygoms, dėl membranos potencialo sumažėjimo, nikotinamido nukleotidų transhidrogenazė (NADPH-transhidrogenazė) negali išlaikyti didelio sumažėjusio NADP + lygio, kuris prisideda prie oksidacinio streso. Fiziologinėmis sąlygomis šis fermentas tiesiogiai reaguodamas regeneruoja NADPH, naudodamas NADH kaip substratą. Ši reakcija yra energetiškai naudinga, nes transhidrogenacija tarp NADH ir NADPH yra susijusi su protonų gradientu palei vidinę membraną. Tačiau patologinėmis sąlygomis jis gali vykti priešinga kryptimi, regeneruodamas NADH ATP sintezei dėl NADPH panaudojimo. Taigi antioksidantų apsauga, susijusi su NADP + sumažinimo lygiu, sumažėja, o tai skatina H 2 O 2 gamybą.

Vaidmuo kalcis ROS kartoje

Yra žinoma, kad kalcio koncentracijos padidėjimas mitochondrijų matricoje sukelia mPTP indukciją, o porų jautrumas katijonui didėja oksidacinio streso, fosfatų lygio padidėjimo ir adenino nukleotidų grupės sumažėjimo dėka. Kalcio jonų koncentracija mitochondrijų matricoje yra apie 10 nM. Tuo pačiu metu jų kalcio talpa yra labai didelė, izoliuotos mitochondrijos sugeba išskirti iš aplinkos daugiau nei 1M kalcio, išlaikydamos laisvojo kalcio koncentraciją mikromoliniame diapazone, kuriame vyksta nuo Ca 2+ priklausomų fermentų reguliavimas. Šie fermentai apima piruvato dehidrogenazę ir α-ketoglutarato dehidrogenazę. Jų aktyvinimas padidina kvėpavimą ir ATP sintezę ir tikriausiai padidina ROS gamybą.

Mitochondrijų membranų pralaidumo procese iš tarpmembraninės erdvės ir matricos išsiskiria apie 100 baltymų, įskaitant tokius svarbius antioksidacinius gynybos elementus kaip glutationas ir citochromas. nuo.

Citochromas nuo yra teigiamai įkrautas baltymas, susijęs su kardiolipinu vidinės mitochondrinės membranos išorėje, taip pat su III ir IV kvėpavimo kompleksais. Įrodyta, kad citochromo išsiskyrimas nuo yra dviejų pakopų procesas, apimantis baltymo atsiskyrimą nuo intramembraninių prisijungimo vietų ir tolesnį jo perkėlimą per išorinę membraną. Ca 2+ gali sustiprinti citochromo disociaciją nuo iš vidinės membranos, nes ji yra konkurentė prisijungiant prie neigiamai įkrauto kardiolipino. Tai skatina citochromo išsiskyrimą nuo indukavus mPTP, į citozolį. Be to, membranos pralaidumo metu susidaręs ROS gali sukelti kardiolipino oksidaciją, dėl ko pasikeičia jo fizinės savybės, o tai taip pat gali padidinti citochromo išsiskyrimą. nuo iš mitochondrijų ir prisideda prie dar didesnės ROS kartos. Sumažėjęs baltymų lygis sulėtina elektronų pernešimą iš III komplekso į IV kompleksą ir taip padidina ROS gamybą Q cikle. Be to, citochromas nuo pats yra veiksmingas antioksidantas, kurį veiksmingai gali sumažinti superoksido anijonas. Taigi kalcio koncentracijos padidėjimas mitochondrijose turi stimuliuojantį poveikį ROS gaminantiems matricos fermentams ir lemia antioksidacinės apsaugos sumažėjimą, tuo padidindamas bendrą mitochondrijų generuojamą ROS lygį.

Išvada

Mitochondrijos yra galimas ROS veikimo šaltinis ir taikinys, lemiantis mitochondrijų funkcijų praradimą ir dėl to negrįžtamą ląstelių pažeidimą daugelyje patologinių procesų. Šiuo atveju mPTP vaidina svarbų vaidmenį, kurio indukcija gali sukelti galingą ROS kartą, kuri daro žalingą poveikį kaimyninėms organelėms ir ištisoms ląstelėms. Šiuo metu šio reiškinio priežastys yra menkai suprantamos, nors literatūroje yra keletas hipotezių. Daroma prielaida, kad ROS sprogimas gali būti pagrįstas kvėpavimo grandinės kompleksų konformaciniais pertvarkymais, matricos dehidrogenazių suaktyvėjimu dėl Ca 2+ veikimo, NAD (P) N / NAD (P) + pusiausvyros pokyčiais. matrica ir antioksidantų sistemos išeikvojimas. Atrodo, kad būtina toliau tirti ROS gamybos mechanizmus ir vietas indukuojant mPTP, nes tikslus jų nustatymas leis sukurti jų reguliavimo metodus, kad būtų išvengta daugelio patologinių organizmo būklių vystymosi.

Šį darbą parėmė Rusijos mokslo fondo dotacija Nr. 17-75-10122.

Bibliografinė nuoroda

Kharechkina E.S., Nikiforova A.B. DIRBINIŲ AKTYVIŲJŲ FORMŲ GAMYBOS MECHANIZMAI MITOCHONDRIALINIŲ VALSTYBIŲ LEIDŽIANT // Šiuolaikinės mokslo ir švietimo problemos. - 2018. - Nr. 4;
URL: http: // site / ru / article / view? Id = 27719 (prieigos data: 2020 01 30).

Jūsų dėmesiui pateikiame leidyklos „Gamtos mokslų akademija“ leidžiamus žurnalus