Sanitarna mikrobiologija. Mikrobiološki pokazatelji okb i tcb u vodi

Higijenski zahtjevi za kvalitetom vode za piće i domaće potrebe zasnivaju se na principu koji se fokusira na kvalitetu vode, o kojoj ovise ljudsko zdravlje i životni uslovi. U skladu sa savremenim sanitarnim zakonodavstvom, voda za piće mora biti epidemijska i zračna, kemijski neškodljiva i imati povoljna organoleptička svojstva.

Epidemijska sigurnost vode za piće određuje se njenom usklađenošću sa standardima za mikrobiološke pokazatelje. Mikrobiološki sastav vode za piće glavni je pokazatelj njenog kvaliteta i pogodnosti za konzumaciju. Ovo uzima u obzir i bakterijsku i virusnu kontaminaciju.

Epidemiološka sigurnost vode za piće u SanPiN-u procjenjuje se pomoću nekoliko pokazatelja. Među njima je velika uloga termotoleriranim koliformima kao istinskim pokazateljima fekalne kontaminacije i općim koliformima.

Uobičajene koliformne bakterije (GCB) su gram-negativne, oksidazno negativne, ne-spore tvoreće štapiće koje mogu rasti na različitim laktoznim medijima, fermentirajući laktozu u kiselinu i gas na temperaturi od +37 tokom 24-48 sati.

Termotolerantne koliformne bakterije (TCB) dio su OKB-a i imaju sve njegove karakteristike, ali za razliku od njih, one mogu fermentirati laktozu u kiselinu, aldehid i plin na temperaturi od +44 tijekom 24 sata. Tako se TCB razlikuje od OKB-a po svojoj sposobnosti da fermentira laktozu u kiselinu i gas na višoj temperaturi. U 100 ml vode za piće (u bilo kojem od uzoraka sa tri ponavljanja analize) ne bi trebalo biti termotolerantnih i općih koliformnih bakterija.

U distributivnoj mreži velikih centraliziranih sistema za opskrbu vodom za piće (s brojem istraženih uzoraka najmanje 100 godišnje) dozvoljeno je 5% nestandardnih uzoraka za ukupne koliformne bolesti, ali ne u dva uzastopno uzeta uzorka u jednom trenutku.

Ukupan broj mikroorganizama (ukupan mikrobni broj - TMC) određuje se rastom na mesopatamia agaru pri temperaturi inkubacije 37. Ovaj pokazatelj koristi se za karakterizaciju efikasnosti pročišćavanja vode za piće, mora se uzeti u obzir prilikom praćenja kvaliteta vode u dinamici. Oštro odstupanje TMP-a čak i unutar standardne vrijednosti (ali ne veće od 50 po 1 ml) služi kao signal kršenja tehnologije obrade vode. Rast TMP-a u vodi distributivne mreže može ukazivati na njegovo nepovoljno sanitarno stanje, što doprinosi razmnožavanju mikroorganizama uslijed nakupljanja organske materije ili curenja, što za sobom povlači usisavanje kontaminirane podzemne vode.

Aerobni saprofiti čine samo dio ukupnog broja mikroba u vodi, ali su važan sanitarni pokazatelj kakvoće vode, jer postoji direktna veza između stepena zagađenosti organskim supstancama i mikrobnog broja. Pored toga, vjeruje se da što je veći ukupan broj mikroorganizama, to je veća vjerojatnost patogenih mikroorganizama u vodi. Broj mikroba u vodi iz slavine ne smije biti veći od 100.

Epidemijska sigurnost vode za piće određuje se njenom usklađenošću sa standardima za mikrobiološke pokazatelje (Tabela 1).

Tabela 1. Mikrobiološki pokazatelji vode za piće

Pojam sanitarno indikativnih mikroorganizama

Glavni zahtjevi za sanitarno-indikativne mikroorganizme: 1. moraju imati zajedničko prirodno stanište s patogenim mikroorganizmima i u velikom broju biti pušteni u vanjsko okruženje; 2. u vanjskom okruženju sanitarno-indikativni mikroorganizmi trebaju biti što ravnomjernije raspoređeni i otporniji od patogenih. Trebali bi izdržati duže u vodi, praktično se ne množeći se, imati veću otpornost na učinke različitih nepovoljnih faktora, trebali bi pokazati manju varijabilnost svojstava i karakteristika; 3. Metode za određivanje sanitarno indikativnih mikroorganizama trebaju biti jednostavne i imati dovoljan stepen pouzdanosti.

Sa stanovišta sanitarne mikrobiologije, procjena kvaliteta vode provodi se kako bi se utvrdila njena sanitarna i epidemiološka opasnost ili sigurnost. Za ljudsko zdravlje. Voda igra važnu ulogu u prenošenju patogena mnogih infekcija, uglavnom crijevnih.

Izravna kvantifikacija svih infekcija za kontrolu kvaliteta vode nije izvediva zbog raznolikosti njihovih vrsta i složenosti analize.

Analiza samo jednog uzorka vode na moguće prisustvo uzročnika tifusne groznice, paratifusa A, paratifusa B, dizenterije, zarazne žutice, vodene groznice i tularemije u potpunosti bi opteretila čitavo osoblje čak i velikog bakteriološkog laboratorija. Uz to, odgovor u ovom slučaju bio bi dat tek nakon 2-3 tjedna, tj. kada je stanovništvo već dugo pilo istraženu vodu.

S obzirom na očitu necelishodnost detaljnog utvrđivanja neškodljivosti vode, krajem 19. stoljeća pokušavalo se zamijeniti potragu za svim vodenim patogenim mikrobima jednim mikrobom, doduše nepatogenim, ali stalno prisutnim u čovjeku izmet. Tada bi se moglo pretpostaviti da ako je voda koja se proučava zaista zagađena izmetom, tada može biti opasno za piće, jer se među zdravom populacijom mogu naći i bolesni i nosači bacila. Potraga za takvim bakteriološkim pokazateljima fekalne kontaminacije okrunjena je uspjehom. Pokazalo se da su u ljudskom izmetu stalno prisutna sljedeća tri mikroba: 1) Escherichia coli; 2) enterokoki; 3) anaerobne bakterije koje tvore spore, uglavnom Bac. perfingens.

Dakle, E. coli prevladava u otpadnim vodama iz domaćinstava. Ali poanta nije samo u njegovom većem sadržaju. Glavna vrijednost bakterijskog pokazatelja fekalne kontaminacije leži u brzini odumiranja većine patogenih mikroba. Samo ako je ovaj uvjet zadovoljen, mikrob koji je stalno prisutan u ljudskom izmetu bit će pokazatelj onečišćenja fekalija.

Ako s ove točke gledišta pristupimo otkrivenim stalnim stanovnicima crijeva, naći ćemo sljedeće: mikrobi iz skupine Bac. perfingens ostaje u vodi mnogo duže od patogenih mikroba; enterokoki, naprotiv, umiru mnogo prije; što se tiče Escherichia coli, vrijeme njenog očuvanja u vodi približno odgovara vremenu preživljavanja patogenih mikroba.

Stoga je glavni sanitarni i bakteriološki pokazatelj vode E. coli. Samo u Rusiji, jedinoj državi na svijetu, kvalitet vode kontrolira bakterija grupe E. coli (indeks BGKP). Ova skupina uključuje sve predstavnike skupine crijevnih bakterija i oportunističke predstavnike.

U skladu s GOST 2874-73 i GOST 18963-73, bakterije skupine E. coli (BGKP) uključuju gram negativne štapiće koji ne tvore spore i fermentiraju laktozu ili glukozu u kiselinu i plin na 37 ° C za 24 sata i nemaju oksidaznu aktivnost. Predstavnici različitih rodova - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella - pripadaju BGKP-u, ali svi se u okolinu puštaju iz crijeva ljudi i životinja. S tim u vezi, njihovo otkrivanje u okolišu treba smatrati pokazateljem zagađenja fekalijama.

Od rodova uključenih u BGKP, rod Escherichia ima najviše sanitarne i indikativne vrijednosti. Prisustvo svih ovih bakterija u okolišu smatra se svježom fekalnom kontaminacijom.

Escherichia - jedna je od pozadinskih vrsta crijeva ljudi i životinja. Rod Escherichia, uključujući vrstu E. coli, pokazatelj svježe fekalne kontaminacije, mogući uzrok toksičnih infekcija. Predstavnici roda u vodi tretiraju se kao termotolerantne koliformne bakterije.

Citrobacter - žive u kanalizaciji, zemljištu i drugim objektima vanjskog okruženja, kao i u fecesu zdravih i bolesnih ljudi s akutnim respiratornim infekcijama. Pripadaju grupi oportunističkih bakterija. (Mikrobiološki rječnik-priručnik, 1999)

Mane Citrobactera kao SPMO uključuju sljedeće:

1. obilje analoga u vanjskom okruženju.

2. varijabilnost u vanjskom okruženju.

3. nedovoljna otpornost na negativne uticaje.

4. sposobnost razmnožavanja u vodi.

5. nejasan indikator čak i za prisustvo Salmonele.

Nedavna istraživanja pokazala su da ne postoji direktna korelacija između prisustva patogenih bakterija i pokazatelja u vodi. U regijama sa intenzivnim antropogenim opterećenjem vodnih tijela zabilježen je pad sadržaja indikatorskih mikroorganizama sa promjenom njihovih bioloških i kulturnih svojstava u kontekstu kvantitativne prevlasti potencijalnih patogenih i patogenih bakterija.

Enterobacter - žive u crijevima ljudi i drugih životinja, nalaze se u zemlji, vodi, hrani, uzrokuju crijevne, urogenitalne, respiratorne i gnojno-upalne bolesti ljudi.

Klebsiella - žive u vodi, tlu, hrani, u crijevima i respiratornom traktu ljudi, sisara, ptica.

Godine 1910. Enterokoki (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) predloženi su za ulogu SPMO.

Enterokoki su rod fakultativnih anaerobnih asporogenih kemoorganotrofnih grama + bakterija. Ćelije su polimorfne. Široko rasprostranjen u prirodi. Oni su jedna od pozadinskih vrsta crijeva ljudi, sisara i ptica. Često se nalazi u flori kože perineuma i genitalnog trakta, nosnim šupljinama, ždrijelu, nosu. Dugo opstaju u tlu i hrani.

Prednosti enterokokusa kao SPMO:

1. stalno je u ljudskom crijevu i neprestano se ispušta u vanjsko okruženje. U isto vrijeme, Enterococcus faecalis uglavnom živi u ljudskom crijevu, pa njegovo otkrivanje ukazuje na kontaminaciju ljudskim fecesom. Enterococcus faecium se u manjoj mjeri javlja kod ljudi. Potonji se uglavnom nalazi u crijevima životinja, iako je Enterococcus faecalis također relativno rijedak.

2. se ne može razmnožavati u vanjskom okruženju, uglavnom se razmnožava Enterococcus faecium, ali ima manji epidemiološki značaj.

3. ne mijenja svoja svojstva u vanjskom okruženju.

4. nema analoge u vanjskom okruženju.

5. otporan na nepovoljne uticaje okoline. Enterococcus je 4 puta otporniji na hlor u odnosu na E. coli. To je njegova glavna prednost. Zbog ove osobine enterokok se koristi prilikom provjere kvaliteta hlorisanja vode, kao i pokazatelj kvaliteta dezinfekcije. Izdržava temperature od 60 ° C, što mu omogućava da se koristi kao pokazatelj kvaliteta pasterizacije. otporan na koncentracije soli od 6,5-17%. Otporan na pH u rasponu 3-12.

6. Za indikaciju enterokoka razvijeni su visoko selektivni mediji. Stopa preživljavanja enterokoka u vodi približava se stopi preživljavanja patogenih enterobakterija. Enterococcus je s pravom drugi nakon sanitarno-indikativnog testa E. coli u ispitivanju vode za piće.

Trenutno je enterokokometrija legalizirana međunarodnim standardom za vodu, kao pokazatelj svježe fekalne kontaminacije. Kada se atipične E. coli pronađu u vodi, prisustvo enterokoka postaje glavni pokazatelj svježe fekalne kontaminacije. Nažalost, u SanPiN 2.1.4.1074-01 definicija enterokoka nije predviđena za vodu za piće.

Skupina Proteus smatra se krivcem truljenja u prirodi, a time i pokazateljima prisutnosti organske materije u vodi rezervoara. Ovo se uglavnom odnosi na jednu vrstu - Pr.vulgaris; druga vrsta, Pr.mirabilis, stanovnik je crijeva ljudi i životinja. Ova ekološka razlika omogućila je prosudbu prirode zagađenja vode i stepena njene epidemijske sigurnosti. Pr.vulgaris može biti pokazatelj fekalne kontaminacije, Pr.vulgaris je pokazatelj povećanja koncentracije organske materije općenito. Slabosti ovog pokazatelja su neprekidno prisustvo - Pr.mirabilis u ljudskom crijevu i sposobnost prilično intenzivnog razmnožavanja obje vrste u vodi. Takođe ne postoji metoda istraživanja koja bi omogućila diferencirano razmatranje obje vrste uz njihovo istovremeno prisustvo u testnom uzorku. Predložena metoda ne ispunjava ovaj zadatak.

Sada je pokazano da se bakterije roda Proteus u 98% slučajeva nalaze u sekretu crijeva ljudi i životinja, od čega je 82% Pr.mirabilis. otkrivanje proteusa u vodi ukazuje na kontaminaciju predmeta raspadajućom podlogom i ukazuje na ekstremni sanitarni problem. Proteometrija je službeno priznata u Sjedinjenim Državama.

Otkrivanje spora sulfidnih redukcionih klostridija vrši se na vodovodima iz površinskih izvora kako bi se procijenila efikasnost tehnološkog tretmana vode. Spore bakterija koje smanjuju sulfid ne bi trebale biti prisutne u 20 ml vode za piće nakon završetka tretmana vodom.

Kao pokazatelj virusne kontaminacije vode za piće, SanPiN uključuje kolifage, koji su najbliži crijevnim virusima po svom biološkom porijeklu, veličini, svojstvima, otpornosti na faktore okoline. Kolafazi se ne smiju nalaziti u 100 ml prečišćene vode za piće.

E. coli (Escherichia coli) je prvi sanitarno-indikativni mikroorganizam koji je zadržao svoj značaj do sada. Davne 1888. godine francuski liječnik E. Mace predložio je upotrebu ove bakterije kao pokazatelja fekalne kontaminacije vode. Treće izdanje Smjernica SZO za praćenje kvaliteta vode za piće preporučuje indikator E. coli (indeks) kao pokazatelj izbora za procjenu svježe fekalne kontaminacije. Termotolerantne koliformne bakterije (TCB) (indeks) preporučuju se kao alternativni pokazatelj zagađenja fekalijama (pod određenim okolnostima). Pokazatelj Coliform bakterija (CB) preporučuje se kao tehnološki pokazatelj za procjenu kvaliteta obrade vode (pokazatelj). Prema nacionalnom regulatornom okviru, koliformne bakterije (CB) u terminologiji SZO odgovaraju pokazatelju General Coliform Bacteria (CBC).

Za određivanje koliformnih indeksa široko se koristi metoda inokulacije membranom, iako metoda titracije nije od manje važnosti. Metode određivanja ovih pokazatelja uvelike se razlikuju ovisno o predmetu koji se proučava i regulatornim i metodološkim dokumentima. Glavni gusti diferencijalni medij za određivanje koliformnih indeksa u domaćim metodama je Endo medij, međutim, u najnovijem izdanju standarda ISO 9308-1: 2000, Endo medij je zamijenjen drugim laktoznim medijem - Tergitol 7... Razlog za ovu promjenu bila je potencijalna karcinogenost fuksina, anilinske boje koja je dio Endo medija. Mediji za obogaćivanje tečnosti koriste se za NHF metodu. Za potencijalno čiste predmete koristi se voda laktoza-pepton, za potencijalno kontaminirane predmete - Kesslerov medijum ili njegovi analozi.

Potrebno je napomenuti medijume kulture nove generacije, koji se često nazivaju "hromogenim". Za razliku od tradicionalnih medija, oni omogućavaju da se ne utvrdi znak, na primjer, upotreba laktoze, već direktno pojedini enzimi, čije je prisustvo karakteristično za željene mikroorganizme. Kromogeni mediji za identifikaciju E. coli, npr. Chromocult ® ili Coli ID, omogućavaju određivanje enzima β-glukuronidaze, visoko specifičnog za ešerihiju. Prisustvo ovog enzima i sposobnost stvaranja indola sa 95% vjerovatnoće ukazuju na to da enterobakterije pripadaju vrsti E. coli. Isti mediji omogućuju i određivanje enzima β-galaktozidaze, što je karakteristično za OKB, ali je vrijednost ovog dijagnostičkog testa upitna: aeromonade, slobodno žive oksidazno pozitivne štapiće, koje nisu u vezi sa OKB, također imaju ovaj enzim. Merck je pokušao poboljšati hromogeno okruženje Hromocult EC i u njega je uveo selektivni aditiv koji inhibira rast aeromonada.

Među inovativnim tehnologijama u polju sanitarne bakteriologije vode treba istaći ispitne sisteme koji koriste suve podloge na specijalnim plastičnim podlogama. Primjer takvih ispitnih sistema su podloge Petrifilm ™ vladari Aqua a posebno proizvod Aqua Coliform brojačka ploča (AQCC, 3M ™ Petrifilm ™), koji je dizajniran za određivanje OKB i TCB u vodi. Jedinstvenost petrifilma (medija na podlogama) leži u njihovoj jednostavnosti upotrebe. Otklanja se naporan stupanj pripreme hranjivih podloga, a olakšava se njihovo skladištenje i odlaganje. Međutim, glavna prednost u odnosu na tradicionalne podloge i podloge na podlogama drugih proizvođača je ta što već u fazi primarne inokulacije, prilikom dobivanja izoliranih kolonija, petrifilmi mogu utvrditi ne samo sposobnost bakterija da iskoriste laktozu u kiselinu, već i detektiraju stvaranje plina . To omogućava da se analiza u većini slučajeva smanji na 1-2 dana. Pored toga, AQCC petrifilmi (za razliku od Endo medija) mogu se inkubirati na 44 ° C, što omogućava potpuno korištenje selektivnog faktora visoke temperature već u fazi primarne inokulacije, zbog čega vrijeme i intenzitet rada u analizi TCB-a je značajno smanjena.

Na selektivnom petrifilmu Aqua Coliform brojačka ploča (AQCC, 3M ™ Petrifilm ™) kolonije OKB i TKB obojene su u intenzivno crvenu boju sa stvaranjem mjehurića plina oko kolonije.

OKB je međunarodna kvalifikacija i oni su uključeni u veliku skupinu BGKP (bakterija iz grupe E. coli). Sadržaj OKB u vodi može se odrediti pomoću dvije metode: metodom membranskog filtra i metodom titracije (fermentacije).

Ispitivanje vode metodom membranskih filtera. Metoda se temelji na filtriranju zadane količine vode kroz membranske filtere, uzgoju usjeva na diferencijalno-dijagnostičkom mediju i naknadnoj identifikaciji kolonija prema kulturnim i biohemijskim karakteristikama.

Titraciona metoda za proučavanje vode. Metoda se zasniva na akumulaciji bakterija nakon sjetve određene količine vode u tečni hranjivi medij, nakon čega slijedi subkultura na diferencijalno-dijagnostičkom mediju i identifikacija kolonija kulturnim i biokemijskim testovima.
"Koliformni organizmi" pripadaju klasi gram-negativnih bakterija, u obliku štapića koji žive i množe se u donjem dijelu probavnog trakta ljudi i mnogih životinja s toplom krvlju, poput stoke i vodenih ptica, sposobnih za fermentaciju laktoze na 35-37 ° C sa stvaranjem kiseline, plina i aldehida. Ulazeći u vodu s fekalnim otpadom, oni mogu preživjeti nekoliko tjedana, iako je velika većina njih lišena sposobnosti razmnožavanja.

Prema nedavnim studijama, zajedno s bakterijama Escherichia (E. Coli), Citrobacter, Enterobacter i Klebsiela, koje se obično pripisuju ovoj klasi, ona uključuje i bakterije Enterobacter cloasae i Citrobadter freundii koje mogu fermentirati laktozu. Te se bakterije mogu naći ne samo u fecesu, već i u okolini, pa čak i u vodi za piće s relativno visokom koncentracijom hranjivih sastojaka. Pored toga, to uključuje vrste koje se rijetko ili uopće ne nalaze u fecesu i koje se mogu razmnožavati u vodi dovoljno dobrog kvaliteta.

TCB - termotolerantna koliformna bakterija. Broj TCB karakterizira stepen fekalne kontaminacije vode u vodenim tijelima i indirektno određuje epidemiološku opasnost u odnosu na patogene crijevnih infekcija. TKB se određuje istim metodama kao i BGKP (OKB).
Uzorkovanje za sanitarne i mikrobiološke studije treba provoditi u skladu s pravilima sterilnosti i svim potrebnim uvjetima koji su za svaki predmet koji se proučava propisani odgovarajućim regulatornim dokumentima.

Pogreške u uzorkovanju rezultirat će netočnim rezultatima. Pri pakovanju i transportu uzoraka potrebno je stvoriti uslove koji isključuju smrt ili umnožavanje izvorne mikrobiote u testnom objektu. Stoga prikupljene uzorke treba što prije dostaviti u laboratoriju na istraživanje.

Ovom metodom analize vode određena količina vode prolazi kroz posebnu membranu veličine pora reda 0,45 μm. Kao rezultat, sve bakterije u vodi ostaju na površini membrane. Nakon toga se membrana s bakterijama na određeno vrijeme stavlja u poseban hranjivi medij na temperaturi od 30-37 ° C. U tom periodu, koji se naziva period inkubacije, bakterijama se daje mogućnost da se razmnožavaju i formiraju različite kolonije koje je već lako izbrojati. Kao rezultat, možete uočiti sljedeće: Ili čak takvu sliku:

Budući da ova metoda analize vode uključuje samo određivanje ukupnog broja bakterija koje stvaraju kolonije različitih vrsta, njeni se rezultati ne mogu koristiti za nedvosmislenu prosudbu prisustva patogenih mikroba u vodi. Međutim, visok broj mikroba ukazuje na opću bakteriološku kontaminaciju vode i veliku vjerovatnoću prisustva patogenih organizama.

Pri analizi vode potrebno je kontrolirati ne samo sadržaj otrovnih hemikalija, već i broj mikroorganizama koji karakteriziraju bakteriološku kontaminaciju vode za piće TMC-ukupnim mikrobnim brojem. U centraliziranoj opskrbi vodom ovaj broj ne smije prelaziti 50 CFU / ml, a u bušotinama, bušotinama - ne više od 100 CFU / ml

Sanitarno i mikrobiološko ispitivanje vode vrši se planirano
nalog u svrhu trenutnog nadzora, kao i za specijalne epidemiološke
indikacije kim. Glavni objekti takvih istraživanja su:

- voda za piće iz centralnog vodovoda (voda iz slavine);

- pitka voda necentralizovanog vodosnabdijevanja;

- voda iz površinskih i podzemnih izvora;

- otpadne vode;

- voda obalnih područja mora;

- voda u bazenu.

Glavni pokazatelji za procjenu mikrobiološkog stanja vode za piće u skladu sa važećim regulatornim dokumentima su:

1. Ukupan mikrobni broj (TMC) - broj mezofilnih bakterija u 1 ml volova.

Ako titar- najmanja količina vode (u ml) u kojoj živi barem jedan
mikrobna ćelija povezana sa BGKP.
BGKP indeks- količina BGKP u 1 litru vode.

3. Broj spora sulfit-redukcionih klostridija u 20 ml vode.

4. Broj kolafaga u 100 ml vode.

Određivanje TMP omogućava procjenu nivoa mikrobiološke kontaminacije vode za piće. Ovaj je pokazatelj neophodan za hitno otkrivanje masivne mikrobiološke kontaminacije.

Ukupan broj mikroba Je li broj mezofilnih aerobnih i fakultativno anaerobnih mikroorganizama sposobnih da formiraju kolonije na hranjivom agaru na 37 ° C i u roku od 24 sata, vidljiv pri dvostrukom uvećanju.

Pri određivanju ukupnog mikrobnog broja, 1 ml ispitne vode unosi se u sterilnu Petrijevu posudu i sipa 10-12 ml toplog (44 ° C) rastopljenog hranjivog agara. Medij se lagano miješa s vodom, ravnomjerno i
bez mjehurića zraka, šireći se po dnu šalice, zatim zatvorite poklopcem i ostavite dok se ne stvrdne. Usjevi se inkubiraju u termostatu na 37 ° C tokom 24 sata. Broji se ukupan broj kolonija uzgajanih u obje ploče i određuje prosjek. Konačni rezultat izražava se brojem jedinica za stvaranje kolonija (CFU) u 1 ml ispitne vode. 1 ml vode za piće ne smije sadržavati više od 50 CFU

Definicija BGKP
Istovremeno se određuju uobičajene koliformne bakterije - OKB i termotolerantne koliformne bakterije - TKB.

OKB - gram negativne šipke koje ne tvore spore i fermentiraju laktozu u kiselinu i gas na 37 ° C tokom 24 do 48 sati. TKB su među OKB-ima, žvaću ih sa znakovima, ali ja fermentiram na 44 ° C. Da bih odredio enterobakterije - metoda mebran filtera ili titracija.

Mikrobni broj - glavni kriteriji za procjenu mikrobiološkog stanja vode za piće, zasnovan na važećim regulatornim dokumentima, je TMC (ukupan mikrobni broj), koji karakterizira broj aerobnih i anaerobnih bakterija u jednom mililitru vode, nastale dnevno na temperaturi od 37 stepeni, u hranjivom mediju.

Pokazatelji kvaliteta vode za piće u vodovodnim sistemima.

Ovaj je pokazatelj praktično neophodan za brzo otkrivanje masivne mikrobiološke kontaminacije.

Za određivanje ukupnog broja mikroba jedan mililitar ispitne vode dodaje se u sterilnu Petrijevu posudu, a zatim se u rastopljeni oblik sipa 10-15 ml toplog (oko 44 ° C) hranjivog agara. Medij se pažljivo pomiješa s vodom, ravnomjerno i bez mjehurića zraka, rasporedi se po dnu posude, zatim zatvori poklopcem i ostavi u Petrijevoj posudi dok se ne stvrdne. Isto se radi u drugoj čaši. Sjetva u termostat se inkubira na 37 ° C 24 sata. Zatim se pri 2x uvećanju pod mikroskopom prebroji ukupan broj kolonija uzgojenih u dve posude i odredi prosečna vrednost. 1 ml vode za piće ne smije sadržavati više od 50 CFU.

(glavna metoda)

Metoda se temelji na filtriranju određene količine vode (300 ml) kroz membranske filtere, uzgoju usjeva na diferencijalnom dijagnostičkom medijumu sa laktozom (Endo) i naknadnoj identifikaciji kolonija prema kulturnim i biohemijskim karakteristikama.

Membranski filtri pripremljeni za analizu (kuhani ili na neki drugi način sterilizirani) postavljaju se sterilnim kleštima u lijevak filtarskog uređaja. Izmjerena količina vode ulijeva se u lijevak uređaja i stvara se vakuum. Nakon filtracije, filter se uklanja i, bez okretanja, postavlja na površinu medija za kulturu Endo.

U jednu šalicu mogu se staviti 3 filtra. Prilikom ispitivanja vode za piće, filtriraju se 3 zapremine od 100 ml. kada se analizira voda nepoznatog kvaliteta, poželjno je filtrirati druge količine vode kako bi se na filteru dobile izolirane kolonije (10,40, 100 i 150 ml).

Filtarske ploče se inkubiraju naopako u termostatu na 37 ° C tokom 24 sata.

Ako na filtrima nema rasta ili su porasle atipične pljesnive, pljesnive, nejasne kolonije, one daju negativan rezultat. U 100 ml ispitivane vode nema OKB i TKB.

Kada tipične izolirane kolonije pozitivne na laktozu rastu na kolonijama filtera (tamnocrvene s otiscima na stražnjoj strani filtra), njihov se broj broji i nastavlja kako bi se potvrdilo da pripadaju OKB i TKB.

Provodi se mikroskopija mrlja iz 3-4 kolonije obojene prema Gramu (uzimaju se u obzir gram negativne);

Utvrdite prisustvo oksidaze (uzmite u obzir oksidazno negativne, jer oksidazno pozitivne gram negativne šipke ne pripadaju enterobakterijama, ali mogu biti, na primjer, pseudomonade);

Utvrditi fermentaciju laktoze u kiselinu i plin na temperaturi od 37 ° C, što je važno za kolonije slabo obojenih i njihov odnos prema OKB, te temperaturu od 44 ± 0,5 ° C, kako bi se riješilo pitanje njihove pripadnosti TKB.

Formulacija oksidaznog testa

Na papir navlažen 1% alkoholnom otopinom α-naftola i 1% vodenom otopinom dimetilfenilendiamina, dio obojene kolonije nanosi se platinastom petljom ili staklenom šipkom. reakcija se smatra pozitivnom ako se u roku od jedne minute najviše 4 pojave plavo ili ljubičasto. Kolonije pozitivne na oksidazu ne uzimaju se u obzir i ne podvrgavaju se daljim istraživanjima.

Filter s kolonijama možete prenijeti na papir natopljen reagensom. Možete koristiti gotove papirne sisteme (NIB) navlažene destilovanom vodom.

Dijelovi kolonija gram negativnih oksidaza negativnih bakterija testirani su na sposobnost fermentacije laktoze. U ovom slučaju koristi se polutekući medij sa laktozom i pH indikatorom. Inokulacija se vrši injekcijom na dno u 2 epruvete. Jedan se inkubira na temperaturi od 37 ± 1 ° C 24-48 sati da bi se potvrdila veza sa OKB, drugi se inkubira na temperaturi od 44 ± 0,5 ° C 24 sata, moguće je računati nakon 4-6 sati kako bi se potvrdilo prisustvo TCB.

Kada se kolonije nanesu na filter, prosijavaju se, a zatim se identificiraju izolirane kolonije. Kolonije se računaju kao OKB - ako su crvene na Endu, sadrže gram negativne oksidazno negativne štapiće koji razlažu laktozu na 37 ° C do kiseline i plina. Kolonije se računaju kao TKB ako sadrže gram negativne oksidazno negativne štapiće koji fermentiraju laktozu na temperaturi od 44 ° C do kiseline i plina (shema br. 2).

ŠEMA br. 2

Datum objave: 2014-11-02; Pročitano: 1811 | Povreda autorskih prava na stranici

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0,001 s) ...

Ukupan broj mikroba