Sanitaire microbiologie. Microbiologische indicatoren van okb en tkb in water

De hygiënische eisen voor de kwaliteit van water voor drinkwater en huishoudelijke behoeften zijn gebaseerd op het principe dat zich richt op de kwaliteit van water, waarvan de menselijke gezondheid en levensomstandigheden afhankelijk zijn. Volgens de moderne sanitaire wetgeving moet drinkwater epidemisch en stralingsveilig zijn, chemisch onschadelijk en gunstige organoleptische eigenschappen hebben.

De epidemische veiligheid van drinkwater wordt bepaald door de naleving van normen voor microbiologische indicatoren. De microbiologische samenstelling van drinkwater is de belangrijkste indicator voor de kwaliteit en geschiktheid voor consumptie. Hierbij wordt rekening gehouden met zowel bacteriële als virale besmetting.

De epidemiologische veiligheid van drinkwater in de SanPiN wordt beoordeeld aan de hand van verschillende indicatoren. Een grote rol onder hen wordt toegewezen aan thermotolerante coliformen als echte indicatoren van fecale besmetting en algemene coliformen.

Gewone coliforme bacteriën (GCB) zijn gramnegatieve, oxidase-negatieve, niet-sporenvormende staafjes die kunnen groeien op differentiële lactosemedia, waarbij lactose tot zuur en gas wordt gefermenteerd bij een temperatuur van +37 gedurende 24-48 uur.

Thermotollerante coliforme bacteriën (TCB) maken deel uit van de OKB en hebben al hun kenmerken, maar in tegenstelling tot hen zijn ze in staat om gedurende 24 uur lactose te fermenteren tot zuur, aldehyde en gas bij een temperatuur van +44. TCB verschilt dus van OKB in zijn vermogen om lactose bij een hogere temperatuur te fermenteren tot zuur en gas. Thermotolerante en algemene coliformen moeten afwezig zijn in 100 ml drinkwater (in elk van de monsters met drie herhalingen van de analyse).

In het distributienetwerk van grote gecentraliseerde drinkwatervoorzieningssystemen (met een aantal geanalyseerde monsters van minimaal 100 per jaar) is 5% van de niet-standaardmonsters voor totale colibacteriën toegestaan, maar niet in twee opeenvolgende monsters op één punt.

Het totale aantal micro-organismen (totaal microbieel aantal - TMC) wordt bepaald door groei op mesopatamia-agar bij een incubatietemperatuur van 37. Deze indicator wordt gebruikt om de efficiëntie van drinkwaterzuivering te karakteriseren, hiermee moet rekening worden gehouden bij het bewaken van de waterkwaliteit in dynamiek. Een scherpe afwijking van de TMP zelfs binnen de standaardwaarde (maar niet meer dan 50 per 1 ml) dient als een signaal van een overtreding in de waterbehandelingstechnologie. De groei van TMP in het water van het distributienetwerk kan wijzen op de ongunstige sanitaire toestand, wat bijdraagt aan de vermenigvuldiging van micro-organismen door de ophoping van organisch materiaal of lekkages, wat het aanzuigen van verontreinigd grondwater met zich meebrengt.

Aërobe saprofyten vormen slechts een deel van het totale aantal microben in water, maar ze zijn een belangrijke sanitaire indicator van de waterkwaliteit, aangezien er een direct verband bestaat tussen de mate van vervuiling met organische stoffen en het microbiële aantal. Bovendien wordt aangenomen dat hoe hoger het totale aantal bacteriën, hoe waarschijnlijker het is dat ziekteverwekkers in het water aanwezig zullen zijn. Het aantal bacteriën in leidingwater mag niet hoger zijn dan 100.

De epidemische veiligheid van drinkwater wordt bepaald door de naleving van de normen voor microbiologische indicatoren (tabel 1).

Tabel 1. Microbiologische indicatoren van drinkwater

Het concept van sanitaire indicatieve micro-organismen

De belangrijkste vereisten voor sanitaire indicatieve micro-organismen: 1. ze moeten een gemeenschappelijke natuurlijke habitat hebben met pathogene micro-organismen en in grote hoeveelheden in de externe omgeving worden vrijgegeven; 2. in de externe omgeving moeten sanitair-indicatieve micro-organismen zo gelijkmatig mogelijk worden verdeeld en resistenter zijn dan pathogene. Ze zouden langer in water moeten blijven, praktisch niet vermenigvuldigen, een grotere weerstand hebben tegen de effecten van verschillende ongunstige factoren, ze zouden minder variabiliteit van eigenschappen en kenmerken moeten vertonen; 3. Methoden voor de bepaling van sanitair-indicatieve micro-organismen dienen eenvoudig te zijn en voldoende betrouwbaar te zijn.

Vanuit het oogpunt van sanitaire microbiologie wordt de waterkwaliteitsbeoordeling uitgevoerd om het sanitaire en epidemiologische gevaar of de veiligheid ervan te bepalen. Voor de gezondheid van de mens. Water speelt een belangrijke rol bij de overdracht van ziekteverwekkers van veel infecties, voornamelijk in de darm.

Directe kwantificering van alle infecties voor waterkwaliteitscontrole is niet haalbaar vanwege de verscheidenheid aan typen en de complexiteit van de analyse.

Het analyseren van slechts één watermonster op de mogelijke aanwezigheid van de veroorzakers van buiktyfus, paratyfus A, paratyfus B, dysenterie, infectieuze geelzucht, waterkoorts en tularemie zou het hele personeel van zelfs een groot bacteriologisch laboratorium volledig belasten. Bovendien zou het antwoord in dit geval pas na 2-3 weken zijn gegeven, d.w.z. wanneer de bevolking het onderzochte water al geruime tijd heeft gedronken.

Aangezien een gedetailleerde bepaling van de onschadelijkheid van water duidelijk ondoelmatig was, werden aan het einde van de 19e eeuw pogingen ondernomen om de zoektocht naar alle in het water levende pathogene microben te vervangen door één microbe, zij het niet-pathogeen, maar constant aanwezig in de mens. ontlasting. Dan zou kunnen worden aangenomen dat als het onderzochte water echt besmet is met uitwerpselen, het gevaarlijk kan zijn om te drinken, aangezien zowel zieken als dragers van bacillen onder de gezonde bevolking kunnen worden gevonden. De zoektocht naar dergelijke bacteriologische indicatoren van fecale besmetting is met succes bekroond. Het bleek dat de volgende drie microben constant aanwezig zijn in menselijke uitwerpselen: 1) Escherichia coli; 2) enterokokken; 3) anaërobe sporenvormende bacteriën, voornamelijk Bac. perfingen.

E. coli overheerst dus in huishoudelijk afvalwater. Maar het gaat niet alleen om de grotere inhoud. De belangrijkste waarde van een bacteriële indicator van fecale besmetting ligt in de snelheid waarmee de meeste pathogene microben afsterven. Alleen als aan deze voorwaarde wordt voldaan, zal de microbe die constant aanwezig is in menselijke uitwerpselen een indicator zijn van fecale besmetting.

Als we de ontdekte permanente darmbewoners vanuit dit oogpunt benaderen, vinden we het volgende: microben van de Bac-groep. perfingens blijft veel langer in water dan pathogene microben; enterokokken daarentegen sterven veel eerder; wat betreft Escherichia coli, komt de tijd van bewaring in water ongeveer overeen met de overlevingstijd van pathogene microben.

Daarom is de belangrijkste hygiënische en bacteriologische indicator van water E. coli. Alleen in Rusland, het enige land ter wereld, wordt de waterkwaliteit gecontroleerd door de bacterie van de E. coli-groep (BGKP-index). Deze groep omvat alle vertegenwoordigers van de groep darmbacteriën en opportunistische vertegenwoordigers.

In overeenstemming met GOST 2874-73 en GOST 18963-73 bevatten bacteriën van de E. coli-groep (BGKP) gramnegatieve, niet-sporenvormende staven die lactose of glucose in 24 uur bij 37 ° C fermenteren tot zuur en gas en hebben geen oxidase-activiteit. Vertegenwoordigers van verschillende geslachten - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella behoren tot BGKP, maar ze komen allemaal uit de darmen van mens en dier in het milieu. In dit opzicht moet hun detectie in het milieu worden beschouwd als een indicator van fecale besmetting.

Van de in de BGKP opgenomen geslachten heeft het geslacht Escherichia de meest sanitaire en indicatieve waarde. De aanwezigheid van al deze bacteriën in het milieu wordt beschouwd als verse fecale besmetting.

Escherichia - is een van de achtergrondtypes van darmen van mens en dier. Het geslacht Escherichia, inclusief de typesoort E. coli, een indicator van verse fecale besmetting, een mogelijke oorzaak van toxische infecties. Vertegenwoordigers van het geslacht in water worden behandeld als thermotollerante coliforme bacteriën.

Citrobacter - leven in rioolwater, bodem en andere objecten van de externe omgeving, evenals in de ontlasting van gezonde en zieke mensen met acute darminfecties. Ze behoren tot de groep van opportunistische bacteriën. (Microbiologisch woordenboek-referentieboek, 1999)

De nadelen van Citrobacter als SPMO zijn onder meer:

1. een overvloed aan analogen in de externe omgeving.

2. variabiliteit in de externe omgeving.

3. onvoldoende weerstand tegen nadelige invloeden.

4. het vermogen om zich in water voort te planten.

5. vage indicator zelfs voor de aanwezigheid van Salmonella.

Recente studies hebben aangetoond dat er geen directe correlatie is tussen de aanwezigheid van pathogene bacteriën en indicatoren in water. In regio's met een intense antropogene belasting van waterlichamen werd een afname van het gehalte aan indicatormicro-organismen met een verandering in hun biologische en culturele eigenschappen waargenomen tegen de achtergrond van een kwantitatieve overheersing van potentieel pathogene en pathogene bacteriën.

Enterobacter - leven in de darmen van mensen en andere dieren, worden aangetroffen in bodem, water, voedsel, ze veroorzaken darm-, urogenitale, respiratoire en purulent-inflammatoire ziekten bij de mens.

Klebsiella - leven in water, bodem, voedsel, in de darmen en luchtwegen van mensen, zoogdieren, vogels.

In 1910. Enterococci (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) zijn voorgesteld voor de rol van SPMO.

Enterokokken zijn een geslacht van facultatief anaërobe asporogene chemoorganotrofe gram + bacteriën. Cellen zijn polymorf. Op grote schaal verspreid in de natuur. Ze zijn een van de achtergrondsoorten van de darmen van mensen, zoogdieren, vogels. Vaak gevonden in de flora van de huid van het perineum en genitaal kanaal, neusholten, keelholte, neus. Ze overleven lang in bodem en voedsel.

Voordelen van Enterococcus als SPMO:

1. bevindt zich constant in de menselijke darm en wordt constant vrijgegeven in de externe omgeving. Tegelijkertijd leeft Enterococcus faecalis voornamelijk in de menselijke darm, daarom duidt de detectie op besmetting met menselijke uitwerpselen. Enterococcus faecium komt in mindere mate voor bij de mens. Dit laatste komt vooral voor in de darmen van dieren, hoewel Enterococcus faecalis ook relatief zeldzaam is.

2. kan zich niet voortplanten in de externe omgeving, voornamelijk Enterococcus faecium vermenigvuldigt zich, maar heeft minder epidemiologische betekenis.

3. verandert zijn eigenschappen niet in de externe omgeving.

4. heeft geen analogen in de externe omgeving.

5. bestand tegen ongunstige omgevingsinvloeden. Enterococcus is 4 keer beter bestand tegen chloor in vergelijking met E. coli. Dit is het belangrijkste voordeel. Vanwege deze functie wordt enterococcus gebruikt bij het controleren van de kwaliteit van waterchlorering, evenals een indicator van de kwaliteit van desinfectie. Bestand tegen temperaturen van 60 ° C, waardoor het kan worden gebruikt als een indicator voor de kwaliteit van pasteurisatie. bestand tegen zoutconcentraties van 6,5-17%. Bestand tegen pH in het bereik van 3-12.

6. Er zijn zeer selectieve media ontwikkeld voor de indicatie van enterokokken. Het overlevingspercentage van enterococcus in water benadert het overlevingspercentage van pathogene enterobacteriën. Enterococcus is terecht de tweede na E. coli sanitair-indicatieve test in de studie van drinkwater.

Momenteel is enterococcometry gelegaliseerd in de internationale standaard voor water, als een indicator van verse fecale besmetting. Wanneer atypische E. coli in water wordt aangetroffen, wordt de aanwezigheid van enterokokken de belangrijkste indicator van verse fecale besmetting. Helaas wordt in SanPiN 2.1.4.1074-01 de definitie van enterococcus niet gegeven voor drinkwater.

De Proteus-groep wordt beschouwd als de boosdoeners van rottingsprocessen in de natuur en daarom als indicatoren voor de aanwezigheid van organisch materiaal in het water van reservoirs. Dit geldt voornamelijk voor één soort - Pr.vulgaris; de tweede soort, Pr.mirabilis, is een bewoner van de darmen van mens en dier. Dit ecologische verschil maakte het mogelijk om de aard van de waterverontreiniging en de mate van epidemische veiligheid te beoordelen. Pr.vulgaris kan een indicator zijn van fecale besmetting, Pr.vulgaris is een indicator van een toename van de concentratie van organische stof in het algemeen. De zwakke punten van deze indicator zijn de inconstante aanwezigheid van - Pr.mirabilis in de menselijke darm en het vermogen tot vrij intensieve reproductie van beide soorten in water. Er is ook geen onderzoeksmethode die een gedifferentieerde beschouwing van beide soorten mogelijk zou maken met hun gelijktijdige aanwezigheid in het testmonster. De voorgestelde methode vervult deze taak niet.

Nu is aangetoond dat bacteriën van het geslacht Proteus in 98% van de gevallen worden aangetroffen in de afscheidingen van de darmen van mens en dier, waarvan 82% Pr.mirabilis. detectie van proteus in water duidt op verontreiniging van het object met rottende substraten en duidt op een extreem sanitair probleem. Proteometrie is officieel erkend in de Verenigde Staten.

De detectie van sporen van sulfidereducerende clostridia wordt uitgevoerd op waterleidingen van oppervlaktebronnen om de effectiviteit van technologische waterbehandeling te beoordelen. Sporen van sulfidereducerende bacteriën mogen na afloop van de waterbehandeling niet in 20 ml drinkwater aanwezig zijn.

Als indicator voor virale besmetting van drinkwater omvat de SanPiN colifagen, die qua biologische oorsprong, grootte, eigenschappen en weerstand tegen omgevingsfactoren het dichtst bij darmvirussen staan. Colifagen mogen niet worden gevonden in 100 ml behandeld drinkwater.

E. coli (Escherichia coli) is het allereerste sanitair-indicatieve micro-organisme dat zijn betekenis tot nu toe heeft behouden. In 1888 stelde de Franse arts E. Mace voor om deze bacterie te gebruiken als indicator voor fecale verontreiniging van water. De derde editie van de WHO-richtlijnen voor de monitoring van de drinkwaterkwaliteit beveelt de E. coli-indicator (index) aan als de indicator bij uitstek voor het beoordelen van verse fecale besmetting. Thermotolerante coliforme bacteriën (TCB) (index) wordt aanbevolen als alternatieve indicator van fecale besmetting (onder bepaalde omstandigheden). De indicator Coliforme bacteriën (CB) wordt aanbevolen als technologische indicator voor het beoordelen van de kwaliteit van de waterbehandeling (indicator). Volgens het nationale regelgevingskader komen Coliform Bacteria (CB) in WHO-terminologie overeen met de indicator General Coliform Bacteria (CBC).

Voor de bepaling van coliforme indices wordt de membraaninoculatiemethode veel gebruikt, hoewel de titratiemethode niet minder belangrijk is. Methoden voor het bepalen van deze indicatoren variëren sterk, afhankelijk van het onderzochte object en regelgevende en methodologische documenten. Het belangrijkste differentiële medium voor de bepaling van coliform-indexen in huishoudelijke methoden is het Endo-medium, maar in de nieuwste editie van de ISO 9308-1: 2000-standaard is het Endo-medium vervangen door een ander lactosemedium - Tergitol 7... De reden voor deze vervanging was de potentiële kankerverwekkendheid van fuchsine, een anilinekleurstof die deel uitmaakt van het Endo-medium. Voor de NHF-methode worden vloeibare verrijkingsmedia gebruikt. Voor potentieel schone objecten wordt lactose-peptonwater gebruikt, voor mogelijk besmette objecten - Kessler's medium of zijn analogen.

Het is noodzakelijk om de cultuurmedia van de nieuwe generatie op te merken, die vaak "chromogeen" worden genoemd. In tegenstelling tot traditionele media, kunnen ze niet een teken bepalen, bijvoorbeeld het gebruik van lactose, maar direct individuele enzymen, waarvan de aanwezigheid kenmerkend is voor de gewenste micro-organismen. Chromogene media voor de identificatie van E. coli, b.v. Chromocult® of Coli ID, maken de bepaling mogelijk van het enzym β-glucuronidase, zeer specifiek voor Escherichia. De aanwezigheid van dit enzym en het vermogen om indool te vormen met een waarschijnlijkheid van 95% geeft aan dat enterobacteriaceae tot de E. coli-soort behoren. Dezelfde media maken het mogelijk om het β-galactosidase-enzym te bepalen, dat kenmerkend is voor OKB, maar de waarde van deze diagnostische test is twijfelachtig: aeromonaden, vrijlevende oxidase-positieve staafjes die niet verwant zijn aan OKB, hebben dit enzym ook . Merck heeft geprobeerd de chromogene omgeving te verbeteren Chromocult EC en daarin een selectief additief geïntroduceerd dat de groei van aeromonaden remt.

Onder de innovatieve technologieën op het gebied van sanitaire bacteriologie van water, moeten testsystemen worden opgemerkt die droge media op speciale plastic substraten gebruiken. Een voorbeeld van dergelijke testsystemen zijn substraten Petrifilm™ heersers Aqua en in het bijzonder het product Aqua Coliform Telplaat (AQCC, 3M™ Petrifilm™), die is ontworpen om de OKB en TCB in water te bepalen. Het unieke van petrifilms (media op substraten) ligt in het gebruiksgemak. De moeizame voorbereidingsfase van voedingsmedia wordt geëlimineerd en hun opslag en verwijdering worden vergemakkelijkt. Het belangrijkste voordeel ten opzichte van traditionele media en media op substraten van andere fabrikanten is echter dat petrifilms al in het stadium van primaire inoculatie bij het verkrijgen van geïsoleerde kolonies het mogelijk maken om niet alleen het vermogen van bacteriën om lactose tot zuur te gebruiken te bepalen, maar ook om gas te detecteren vorming. Hierdoor kan de analyse in de meeste gevallen worden teruggebracht tot 1-2 dagen. Bovendien kunnen AQCC-petrifilms (in tegenstelling tot Endo-medium) worden geïncubeerd bij 44 ° C, waardoor volledig gebruik kan worden gemaakt van de selectieve factor van hoge temperatuur al in het stadium van primaire zaaien, waardoor de tijd en arbeidsintensiteit bij de analyse van TCB's aanzienlijk wordt verminderd.

Op selectieve petrifilm Aqua Coliform Telplaat (AQCC, 3M™ Petrifilm™) kolonies van OKB en TKB zijn intens rood gekleurd met de vorming van gasbellen rond de kolonie.

OKB is een internationale kwalificatie, en ze zijn opgenomen in een grote groep van BGKP (bacteriën van de Escherichia coli groep). Het gehalte aan OKB in water kan op twee manieren worden bepaald: de membraanfiltermethode en de titratie (fermentatie) methode.

Studie van water door de methode van membraanfilters. De methode is gebaseerd op filtratie van een vast volume water door membraanfilters, het telen van gewassen op een differentieel diagnostisch medium en daaropvolgende identificatie van kolonies door culturele en biochemische kenmerken.

Titratiemethode voor het bestuderen van water. De methode is gebaseerd op de accumulatie van bacteriën na het zaaien van een gespecificeerde hoeveelheid water in een vloeibaar voedingsmedium, gevolgd door subcultuur op een differentieel diagnostisch medium en identificatie van kolonies door culturele en biochemische tests.
"Coliforme organismen" behoren tot de klasse van gramnegatieve bacteriën, in de vorm van staafjes die leven en zich vermenigvuldigen in het onderste deel van het spijsverteringskanaal van mensen en veel dieren met warm bloed, zoals vee en watervogels, die lactose kunnen fermenteren bij 35-37°C met vorming van zuur, gas en aldehyde. Als ze met fecaal afval in het water komen, kunnen ze enkele weken overleven, hoewel ze in de overgrote meerderheid het vermogen om zich voort te planten hebben onthouden.

Volgens recente studies omvat het naast de bacteriën Escherichia (E. Coli), Citrobacter, Enterobacter en Klebsiela, die gewoonlijk in deze klasse worden ingedeeld, ook de bacteriën Enterobacter cloasae en Citrobadter freundii die lactose kunnen fermenteren. Deze bacteriën komen niet alleen voor in de ontlasting, maar ook in het milieu en zelfs in drinkwater met een relatief hoge concentratie aan nutriënten. Daarnaast zijn dit soorten die zelden of helemaal niet in de ontlasting voorkomen en zich kunnen voortplanten in water van voldoende goede kwaliteit.

TCB - thermotolerante coliforme bacteriën. Het aantal TCB's kenmerkt de mate van fecale verontreiniging van water in waterlichamen en bepaalt indirect het epidemische gevaar in relatie tot pathogenen van darminfecties. TKB wordt op dezelfde manier bepaald als BGKP (OKB).
Bemonstering voor sanitaire en microbiologische studies moet worden uitgevoerd in overeenstemming met de regels van steriliteit en alle noodzakelijke voorwaarden die voor elk te bestuderen object worden geregeld door de relevante regelgevende documenten.

Fouten bij het nemen van monsters leiden tot onjuiste resultaten. Bij het verpakken en transporteren van monsters is het noodzakelijk om omstandigheden te creëren die de dood of vermenigvuldiging van de oorspronkelijke microbiota in het testobject uitsluiten. Daarom moeten de verzamelde monsters zo snel mogelijk aan het laboratorium worden geleverd voor onderzoek.

Bij deze methode van wateranalyse wordt een bepaalde hoeveelheid water door een speciaal membraan geleid met een poriegrootte in de orde van grootte van 0,45 m. Hierdoor blijven alle bacteriën in het water op het membraanoppervlak. Daarna wordt het membraan met bacteriën een bepaalde tijd in een speciaal voedingsmedium bij een temperatuur van 30-37°C geplaatst. Tijdens deze periode, de incubatieperiode genoemd, krijgen bacteriën de kans om zich te vermenigvuldigen en aparte kolonies te vormen die al gemakkelijk te tellen zijn. Als resultaat kunt u het volgende waarnemen: Of zelfs zo'n afbeelding:

Aangezien deze methode van wateranalyse alleen de bepaling van het totale aantal kolonievormende bacteriën van verschillende typen omvat, kunnen de resultaten ervan niet worden gebruikt om de aanwezigheid van pathogene microben in het water ondubbelzinnig te beoordelen. Een hoog kiemgetal duidt echter op een algemene bacteriologische verontreiniging van het water en een grote kans op de aanwezigheid van pathogene organismen.

Bij het analyseren van water is het noodzakelijk om niet alleen het gehalte aan giftige chemicaliën te controleren, maar ook het aantal micro-organismen dat bacteriologische besmetting van drinkwater kenmerkt met TMC-totaal microbieel aantal. In gecentraliseerde watervoorziening mag dit aantal niet hoger zijn dan 50 CFU / ml, en in putten, putten - niet meer 100 CFU / ml

Sanitair en microbiologisch onderzoek van water wordt uitgevoerd in een geplande
opdracht voor het huidige toezicht, evenals voor speciale epidemiologische
kim indicaties. De belangrijkste doelen van dergelijk onderzoek zijn:

- drinkwater uit de centrale watervoorziening (kraanwater);

- drinkwater van niet-gecentraliseerde watervoorziening;

- water van oppervlakte- en ondergrondse waterbronnen;

- afvalwater;

- water van de kustzones van de zeeën;

- zwembadwater.

De belangrijkste indicatoren voor het beoordelen van de microbiologische toestand van drinkwater in overeenstemming met de huidige regelgevende documenten zijn:

1. Totaal microbieel aantal (TMC) - het aantal mesofiele bacteriën in 1 ml ossen.

Als titer- de kleinste hoeveelheid water (in ml) waarin ten minste één levende
microbiële cel gerelateerd aan BGKP.
BGKP-index- de hoeveelheid BGKP in 1 liter water.

3. Het aantal sporen van sulfietreducerende clostridia in 20 ml water.

4. Het aantal colifagen in 100 ml water.

Bepaling van TMP maakt het mogelijk om het niveau van microbiologische verontreiniging van drinkwater te beoordelen. Deze indicator is onmisbaar voor de dringende detectie van massale microbiële besmetting.

Totaal aantal bacteriën Is het aantal mesofiele aërobe en facultatief anaërobe micro-organismen die in staat zijn kolonies te vormen op voedingsagar bij 37 ° C en binnen 24 uur, zichtbaar bij tweevoudige vergroting.

Bij het bepalen van het totale microbiële aantal wordt 1 ml van het testwater in een steriele petrischaal gebracht en wordt 10-12 ml warme (44 ° C) gesmolten voedingsagar gegoten. Het medium wordt voorzichtig gemengd met water, gelijkmatig en
zonder luchtbellen, verspreid over de bodem van de beker, sluit dan af met een deksel en laat het stollen. Gewassen worden 24 uur in een thermostaat bij 37 ° C geïncubeerd. Het totale aantal kolonies dat in beide platen is gegroeid, wordt geteld en het gemiddelde wordt bepaald. Het eindresultaat wordt uitgedrukt door het aantal kolonievormende eenheden (KVE) in 1 ml van het testwater. 1 ml drinkwater mag niet meer dan 50 CFU bevatten

Definitie van BGKP
Tegelijkertijd worden gewone coliforme bacteriën bepaald - OKB en thermotolerante coliforme bacteriën - TKB.

OKB - gram-negatieve, niet-sporenvormende staafjes die lactose 24 tot 48 uur bij 37 ° C fermenteren tot zuur en gas. TKB's behoren tot de OKB's, ze kauwen erop met tekens, maar ik fermenteer bij 44 ° C. Om enterobacteriën te bepalen - de methode van mebranfilters of titratie.

Microbieel getal - de belangrijkste criteria voor het beoordelen van de microbiologische toestand van drinkwater, op basis van de huidige regelgevende documenten, is de TMC (totaal microbieel getal), die het aantal aërobe en anaërobe bacteriën karakteriseert in één milliliter water, gevormd per dag bij een temperatuur van 37 graden, in een voedingsbodem.

Kwaliteitsindicatoren van drinkwater in watervoorzieningssystemen.

Deze indicator is vrijwel onmisbaar voor de snelle detectie van massale microbiële besmetting.

Voor bepaling van het totale aantal bacteriën een milliliter van het testwater wordt toegevoegd aan een steriele petrischaal en vervolgens wordt 10-15 ml warme (ongeveer 44 ° C) voedingsagar in gesmolten vorm gegoten. Het medium wordt zorgvuldig gemengd met water, gelijkmatig en zonder luchtbellen, verdeeld over de bodem van de schaal, vervolgens afgesloten met een deksel en in de petrischaal gelaten totdat het stolt. Hetzelfde wordt gedaan in een andere beker. Zaaien in een thermostaat wordt 24 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Vervolgens wordt onder een vergroting van 2x onder een microscoop het totale aantal in twee schalen gekweekte kolonies geteld en wordt het gemiddelde bepaald. 1 ml drinkwater mag niet meer dan 50 kve bevatten.

(hoofdmethode)

De methode is gebaseerd op filtratie van een bepaald volume water (300 ml) door membraanfilters, het telen van gewassen op een differentieel diagnostisch medium met lactose (Endo) en daaropvolgende identificatie van kolonies door culturele en biochemische kenmerken.

Membraanfilters die voor analyse zijn bereid (gekookt of anderszins gesteriliseerd) worden met een steriel pincet in de trechter van het filterapparaat geplaatst. Een afgemeten hoeveelheid water wordt in de trechter van het apparaat gegoten en er wordt een vacuüm gecreëerd. Na filtratie wordt het filter verwijderd en, zonder het om te keren, op het oppervlak van het Endo-kweekmedium geplaatst.

Er kunnen 3 filters in één kopje worden geplaatst. Bij het onderzoeken van drinkwater worden 3 volumes van 100 ml gefilterd. bij het analyseren van water van onbekende kwaliteit, is het raadzaam om andere volumes water te filteren om geïsoleerde kolonies op het filter te verkrijgen (10,40, 100 en 150 ml).

De filterplaten worden 24 uur ondersteboven bij 37°C in een thermostaat geïncubeerd.

Als er geen aangroei op de filters zit of atypische filmachtige, beschimmelde, vage kolonies zijn gegroeid, geven ze een negatief resultaat. OKB en TKB zijn afwezig in 100 ml van het onderzochte water.

Wanneer typische geïsoleerde lactose-positieve kolonies op filters (donkerrood met afdrukken op de achterkant van het filter) groeien, wordt hun aantal geteld en wordt bevestigd dat ze tot OKB en TKB behoren.

Microscopie van uitstrijkjes van 3-4 kolonies gekleurd volgens Gram wordt uitgevoerd (er wordt rekening gehouden met gram-negatieve);

Bepaal de aanwezigheid van oxidase (houd rekening met oxidase-negatief, want oxidase-positieve gram-negatieve staafjes behoren niet tot enterobacteriën, maar kunnen bijvoorbeeld pseudomonaden zijn);

Bepaal de fermentatie van lactose tot zuur en gas bij een temperatuur van 37 ° C, wat belangrijk is voor zwak gekleurde kolonies en hun relatie tot OKB, en een temperatuur van 44 ± 0,5 ° C, om het probleem op te lossen dat ze behoren tot TKB.

Formulering van de oxidasetest

Op papier bevochtigd met 1% alcoholische oplossing van α-naftol en 1% waterige oplossing van dimethylfenyleendiamine, wordt een deel van de gekleurde kolonie aangebracht met een platinalus of een glazen staaf. de reactie wordt als positief beschouwd als er binnen 1 minuut maximaal 4 blauw of violet verschijnen. Met oxidase-positieve kolonies wordt geen rekening gehouden en wordt niet verder onderzocht.

U kunt het filter met kolonies overbrengen op papier gedrenkt in reagens. U kunt kant-en-klare papiersystemen (NIB's) gebruiken die zijn bevochtigd met gedestilleerd water.

Delen van kolonies van gram-negatieve oxidase-negatieve bacteriën worden getest op het vermogen om lactose te fermenteren. In dit geval wordt een halfvloeibaar medium met lactose en een pH-indicator gebruikt. Inoculatie wordt uitgevoerd door een injectie in de bodem in 2 reageerbuizen. De ene wordt 24-48 uur bij een temperatuur van 37 ± 1 ° C geïncubeerd om de relatie met OKB te bevestigen, de andere wordt 24 uur bij een temperatuur van 44 ± 0,5 ° C geïncubeerd, het is mogelijk om na 4-6 te tellen uur om de aanwezigheid van TCB te bevestigen.

Wanneer de kolonies op het filter worden aangebracht, worden ze gezeefd, waarna de geïsoleerde kolonies worden geïdentificeerd. Kolonies worden geteld als OKB - als ze rood zijn op Endo, bevatten ze gram-negatieve oxidase-negatieve staafjes die lactose bij 37 ° C ontleden tot zuur en gas. Kolonies worden als TKB geteld als ze gram-negatieve oxidase-negatieve staafjes bevatten die lactose bij een temperatuur van 44 ° C fermenteren tot zuur en gas (schema nr. 2).

SCHEMA nr. 2

Datum van publicatie: 2014-11-02; Lees: 1811 | Schending van pagina-auteursrecht

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (0.001 s) ...

Totaal aantal bacteriën